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0.2 ml
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文献和实验灯下切取特异的扩增谱带 2 将挖取的琼脂糖凝胶置于1.5ml Eppendorf管中,加50µl TE,用枪头捣碎凝胶后于45℃水浴30min。 3 离心5分钟后,取上清夜继续进行PCR,反应条件同第一次PCR。 体系各成分 用 量(μL
,避免污染机会。另外,PCR 试剂,PCR 反应液应与样品及PCR 产物分开保存,不应放于同一冰盒或同一 冰箱。 4、防止操作人员污染,使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用。 5、设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应有一管不加模板的试剂对照 及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。 6、减少PCR 循环次数,只要PCR 产物达到检测水平就适可而止。 7、选择质量好的Eppendorf 管,以避免样本外溢
试剂 的污染:主要是由于在PCR 试剂 配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水 及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量 大(一般为1013拷贝/ml),远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物 污染,就可造成假阳就可形成假阳性. 还有一种容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动
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