Cas9 RT-PCR Primer Set (50ul a

Disruption by Fusion PCR

:   2.5ul of each fragment 5ul 5uM Primer1 5ul 5uM m13 reverse primer 5ul 10xTaq Buffer 5ul 2mM dNTPs 1ul Taq H2O to 50ul 10X TAQ Buffer: 0.2M TRIS pH8.3 15mM MgCl

Colony PCR

up the PCR reaction as follows:   5ul H2O + cells 5ul 5uM primer2 5ul 10XTaq Buffer 5ul 2mM dNTPs 0.5ul 10 mg/ml acetylated BSA 1ul Taq DNA polymerase 23.5 ul H2O PCR Conditions: 94¡C x 4min

PCR实用大全

PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。三、引物GC含量在40%~60%之间，Tm值