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文献和实验使用Clontech公司的In-Fusion PCR Cloning Kit快两年了,在此谈谈心得。早期的In-Fusion PCR Cloning Kit是干粉,现在已经发展成为试剂盒,两种我都用过。此方法最大的优点就是不用考虑插入片段的正反性,只要链接成功就是阳性克隆。但是有时候链接效率低,比较不容易得到阳性克隆,因为我没有使用同类的其他链接方法,所以也不知道两者比较起来如何,但是据我的老师说这个方法效率高。在整个过程中,我觉得应该注意的有以下几点:1 载体的酶切效率。此法需要使用两种
Preparation of Competent Cells 制备感受态细胞
Donis-Keller Lab Manual, Department of Genetics in Washington University School of MedicinePurpose:To maintain lab stock of highly efficient low background LM 1035 XL1-Blue and SURE competent cells for plasmid/cosmid transformations (Note
实验概要 Competent cells are those that possess more easily altered cell walls that DNA can be passed through easily. These cells readily incorporate foreign DNA. On example of a competent cell is E. coli.
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