目录号:E035-02A
产品描述:
本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3x10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间,非常适用于1-20kb长片段的扩增。
产品特点:
高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。
灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例一)。
快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上,可在较短时间内获得高产量的PCR产物(图例二)。
快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
产品用途:
用于要求保真度比较高,扩增长度较长的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
使用建议:
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3´端"A"突出,除使用NovoRec® PCR一步定向克隆试剂盒(Cat. No: NR005)外,其它PCR产物的克隆方案有:
1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。
2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。
3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3´→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。
保存温度:
-20℃
应用实例:
图例一)50μl扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,扩增1.2kb的特定基因片段
泳道1:50ng;泳道2:5ng;
泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;
泳道M:DNA Ladder 2000。
图例二)50μl扩增体系中,λDNA为模板,扩增1kb~20kb片段。
泳道M:λ/Hind III DNAMarker;
泳道1:1kb;泳道2:2kb;
泳道3:4kb;泳道4:6kb;
泳道5:8kb;泳道6:10kb;
泳道7:12kb;泳道8:20kb。
参考文献:
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Structural Characterization and Evolutionary Analysis of Enoyl-CoA Hydratase in Mycobacterium tuberculosis[J]. Cuiping Wang et al. Journal of Biobased Materials and Bioenergy. 2019.
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For research use only.