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文献和实验. 真空离心干燥 3~5 分钟,或放在室温下使乙醇完全挥发掉。 12. 沉淀用30 μl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶,68 ℃处理 10 min。 13. RNA检测 (1)测定样品在260 nm和280 nm的吸光值 按1OD=40 μg/ ml RNA计算RNA的产量。OD260/OD280在1.8-2.0 。 (2)进行甲醛变性琼脂糖凝胶电泳确定RNA的完整性和污染情况。 低得率:A.样品裂解或匀浆处理不彻底;B.最后得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
液裂解细胞,用移液器适当吹打使细胞脱落,大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解,裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理:先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基,每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min,取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周,-20℃ 可保存约 2 个月,-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定:酶标板,酶标仪、离心机、1 mg/mL
开发灵敏度高、重复性好的侧向层析诊断产品---第一部分:对于老问题的新方法
的信号灵敏度和更高的变异系数(CV),结论为封闭不适合应用在诊断试纸。然而,当检查移除封闭步骤对系统稳定性的影响时,非封闭的膜对诊断产品的重大影响非常明确,原因是干燥包装储藏后诊断反应时间发生了变化。 图8(a)封闭和未封闭膜在变异系数和线强度方面的比较。(b)封闭对膜层析速率稳定性的影响。柱条表示诊断试剂流动通过25mm膜的时间。DB=浸泡封闭,UB=未封闭。 标记物垫:玻璃纤维、聚酯膜和人造纤维 在典型的诊断系统中,标记物垫承载标记物、保证其在产品保质期内的稳定性和有效的、重复性好的释放
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