一步法恒温支原体检测试剂盒

一步法恒温支原体检测试剂盒

One-step Mycoplasma Detection kit

品牌：百生跃（Macklin全资子公司）
产品编号：BR3002430
储存/运输：避光,-20℃
运输方式：冰袋
保质期：1年
产品规格：25T，50T，大包装请询公司销售
商品属性：
本产品遵循 cGMP 规范生产。本产品为一步法恒温支原体检测试 剂盒，专门针对细胞培养液中支原体污染的快速检测产品。本产 品采用独特的等温扩增技术，可以检测多种支原体，包括细胞培 养过程中常见的 13 种支原体，反应完毕后，通过反应管的颜色 即可对检测结果进行判断。传统巢式 PCR 支原体法检测法易受 细胞培养上清中抑制物的影响，产生假阴性结果，反应后需开盖 电泳检测，增加污染导致的假阳性风险。本产品没有上述缺点， 可检出 10 个拷贝以上的支原体污染，灵敏度、准确性远远高于 PCR 法。
BR1002398 产品包装清单 25T 50T
BR3002430.1 试剂 A 550μL 1.1mL
BR3002430.2 试剂 B 25μL 50μL
BR3002430.3 试剂 C 50μL 100μL
BR3002430.4 阳性对照 DNA 10μL 10μL
BR3002430.5 矿物油 500μL 1mL
BR3002430.m 说明书 1 份 1 份

产品使用说明
1. 支原体待测样品准备： 贴壁细胞：直接吸取上清。建议在细胞传代或换液 3 天以上， 且汇合度达到 90%左右时取样，此时上清中支原体含量较高， 便于检出。 悬浮细胞：500g 离心 5 min 后，吸取上清。建议在细胞传代或 换液 3 天以上时取样，此时支原体含量较高，便于检出。 注：已收集的待测细胞培养液样品如果不立即检测，请于-20℃或-80℃冰 箱保存，不得放于室温或 4℃冰箱！样品在-20℃可以保存至少一个月，在80℃可以长期保存。
2. 反应体系的配制(请在操作之前先仔细阅读注意事项，之后 再进行操作)： 1）将试剂 A 从-20℃冰箱中取出，室温融化，颠倒混匀，瞬时 离心确保所有液体落到管底，按表格进行反应体系的配制： 恒温反应体系 溶液类型 单个样品体积 样品总数(个) 总体积 试剂 A 21.5μL N —— 试剂 B 1μL N —— 试剂 C 1.5μL N —— 注：试剂 A 和试剂 B 使用完后，请继续放回-20℃冰箱中保存，试剂 B 必须 一直在-20℃冰箱中保存，不能放于室温。 2） 将上述配制好的反应体系，吹打均匀后，按每 24μL 分装至 PCR 管中。 注：保证每管的反应液体积一样，PCR 管应该使用透明度良好的薄壁 PCR 管。 3） 阴性对照管可以不加，也可加入 1μL 灭菌水。测试管中加 入 1μL 待测细胞培养液。阳性对照管中加入 1μL 阳性对照 DNA。反应液的总体积 25μL。 注：反应体系配制的房间，与样品前处理、加阳性对照 DNA、样品 DNA 的房间最好分开。
3. 扩增反应： 请选择以下方式之一进行反应： 1）水浴内反应(本产品不能在金属浴内反应）：每个反应管内加 入 20μL 矿物油，以防止水份挥发，盖上盖子，将反应管插入带 孔的漂板内，放入已经升温到 65℃的水浴内，准确反应 60 分 钟。 注：在反应之前，水浴锅必须先升温到 65℃，再放入反应管。此外，必须 用温度计测量水温，确保水浴锅的温度准确。本试剂盒所用的酶对温度 非常敏感，只允许仪器显示温度与实际温度的温差不超过 1℃。 2）PCR 仪上反应(有 PCR 仪的实验室，强烈建议在 PCR 仪上进 行反应，这样可以准确控制反应的时间和温度)：PCR 仪参数设 置如下：65℃，60 min；10℃, forever；热盖温度：100℃。注：在带热盖的 PCR 仪上进行反应，无需在反应管内加入矿物油。
4. 结果判断：65℃反应 60 分钟后，立刻取出反应管，在光线 良好的环境中观察(建议以白纸或白色泡沫为背景)，通过反应管 溶液颜色的变化，即可判断检测结果。如果溶液为天蓝色，则 说明有支原体污染(阳性)。如果为蓝紫色，则说明没有支原体污 染(阴性)。 注：1）在 65℃反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能 会出现假阳性(最多不得超过 5 分钟)。如果试剂盒已经过期或者发生其他意 外情况影响酶活性时，万一发现：65℃反应 60 分钟后，阳性不呈明显的天 蓝绿，可以考虑将已经反应 60 分钟的反应管，继续在 65℃的水浴或 PCR 仪上反应 15 分钟。但是如果 65℃反应 60 分钟后，阳性已经呈现明显的天 蓝绿并且阳性与阴性的区别一眼就可以看出，不得继续反应，否则可能出现 假阳性。以上只是意外情况下的补救措施。 2）如果反应后，发现个别样品的颜色介于阳性和阴性之间，可以将这些样 品单独继续 65℃反应 10 分钟。10 分钟后，如果其颜色仍然与阳性对照的 颜色不同，该样品应该判为阴性。 3）反应后，请勿打开反应管的盖子，否则有可能造成检测环境的污染。结 果判断完后，将其用自封袋密闭，扔到另外一个房间的垃圾桶内。

储存条件：避光,-20℃，运输方式：冰袋，本产品仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。了解更多详情，请咨询百生跃官网：www.bioleaper.com