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一年
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青岛海博生物
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10个/盒
文献和实验2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
/L 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)磷酸氢二钠 (Na2 HPO4,28.4 g/L)440 mL, 磷酸二氢钠 (NaH2PO4·H2O,27.6 g/L)60 mL,调 pH 至 7.4,0.103 MPa 20 min 灭菌或滤菌。1.2.1.3 辅酶-Ⅱ(氧化型) 溶液无菌条件下称取辅酶-Ⅱ,用无菌蒸馏水溶解配制成 0.025mol/L 溶液,现用现配。 1.2.1.4 葡萄糖- 6 -磷酸钠盐溶液称取葡萄糖- 6 磷酸钠盐, 用蒸馏水溶解配制成 0.05 mol/L 溶液,过滤灭菌。现用
1.1 抗体的酶标记及质量鉴定 本试验采用改良过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记在抗体上[1],标记完后取上清用Sephedex G200 凝胶层析进行纯化,洗脱液为0.2mol/L pH7.4的PBS,流速为15ml/h,分步收集,每支3ml,以紫外分光光度计测A280吸光度值,以洗脱体积为横坐标,吸光值为纵坐标做图,收集第一峰即为酶标抗体峰。 标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记
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