QuDye dsDNA BR 检测试剂盒（针对 Qubit®

QuDye dsDNA BR 检测试剂盒（针对 Qubit® 进行了优化）详细如下：
该试剂盒用于使用 Qubit™ 荧光计（可以使用任何版本）对大范围的双链 DNA 进行定量。该试剂盒包括 QuDye dsDNA BR 荧光染料浓缩液 200x、用于制备染料工作溶液的缓冲液和 DNA 浓度标准品（0 和 100 ng/µL）。QuDye dsDNA BR 试剂对双链 DNA 具有选择性，因此测量结果不受 RNA、游离核苷酸或蛋白质污染物的影响。盐、去污剂和溶剂等其他少量污染物对测量结果没有显着影响。该试剂盒允许在 100 pg/µL 至 1000 ng/µL 范围内对初始样本进行准确的 dsDNA 定量（使用 Qubit™ 测量的 DNA 量范围：200 µL 测试样本中含有 2–1000 ng DNA）。
试剂盒的主要成分是 QuDye dsDNA BR 荧光染料，它可以选择性地与 DNA 相互作用，并在与 DNA 分子结合时表现出增强的荧光。该试剂盒可在较宽的浓度范围内方便地进行 dsDNA 定量，并且不需要大量的初始样品（测定需要 1–20 µL）。所有测量均在室温下进行，平均耗时 15-20 分钟（取决于样品量）。样品荧光稳定 3 小时。要进行测量，请准备染料工作溶液，在单独的试管中稀释 DNA 标准品和实验样品，并使用 Qubit™ 荧光计进行荧光测量。为了您的方便，我们提供的套件包括与 Qubit™ 荧光计兼容的薄壁管。
该试剂盒还可与QuDye 蛋白质定量试剂盒一起使用，以确定 DNA 样品中的蛋白质污染物。
如需定量较低浓度的 dsDNA，请使用QuDye dsDNA HS 检测试剂盒，初始样品浓度范围为 10 pg/µL 至 100 ng/µL。

QuDye dsDNA BR Assay Kit（Broad Range）用于使用 Qubit™ 荧光计对双链 DNA 进行定量。QuDye dsDNA BR 试剂选择性地结合双链 DNA，因此样品中的任何 RNA、单链 DNA、游离核苷酸或蛋白质污染物都不会改变测量结果。盐、去污剂和溶剂等其他少量污染物对测量结果没有显着影响。但是，建议尽量减少或完全消除样品中的它们。所有试剂都针对 Qubit™ 荧光计（所有版本）的操作进行了优化，初始 DNA 浓度范围为 100 pg/μL 至 1000 ng/μL（初始样品稀释后 DNA 的最终量为 2-1000 ng在 200 μL 的测试样品中）。所有测量均在室温下进行

套件组件

！QuDye dsDNA BR Assay Kit 的所有测量都应在室温 (22–28 °C) 下进行。在开始之前，将所有试剂盒的溶液平衡至室温。定期使用该试剂盒时，将 QuDye dsDNA BR Reagent 和 QuDye BR Buffer 储存在室温、标准品 — +4 °C 下。
！请注意，样品温度的波动会显着影响测量结果。避免加热样品；特别是在使用 Qubit™ 荧光计进行荧光测量之前，请勿将分析管握在手中。如果在 Qubit™ 荧光计室中停留的时间很短，则装有样品的试管会变热，因此请在将装有样品的试管放入荧光计室后立即进行测量。如果必须重新读取一个样品，则应在读取后立即将装有样品的试管从荧光计中取出，并仅在测量荧光时才将其放入荧光计室中。

协议

1. 考虑到每个样品和两个标准中的每一个都需要 200 μL 的染料工作溶液，准备QuDye dsDNA BR 染料工作溶液。为此，使用QuDye BR Buffer将 200× QuDye dsDNA BR Reagent 浓缩液稀释 200 倍。
    
   例如，要测量 3 个样品和 2 个标准品，准备 200 μL x 5 = 1000 μL 染料工作溶液（混合 5 μL QuDye dsDNA BR Reagent 浓缩液和 995 μL QuDye BR Buffer）。
    
   ！建议在配制后数小时内使用染料工作液。在延迟测量的情况下，保护准备好的染料工作溶液免受光照。
    
   ！仅使用塑料容器制备染料工作溶液，因为 QuDye dsDNA BR Reagent 可以吸附到玻璃表面，导致样品中染料浓度降低和测量结果偏差。
2. 为标准设置两个 0.5 mL 管（薄壁和光学透明），为每个样品设置一个管。标记管盖。不要标记试管的侧面，因为这会干扰样品读取。
3. 向用于标准品的两个试管中的每一个添加 190 µL  QuDye dsDNA BR 染料工作溶液和 10 µL  0 ng/µL（标准 #1）的定量标准或 100 ng/uL（标准 #2）的 dsDNA 定量标准。涡旋 2-3 秒并短暂离心。
4. 每管样品分别加入 180–199 µL  QuDye dsDNA BR 染料工作溶液和 20–1 µL 测试样品（每管总体积应为 200 µL）。涡旋 2-3 秒并短暂离心。确保管中没有形成气泡。如有必要，通过离心去除气泡。
    
   实验样品的稀释是可选的，取决于其初始浓度。初始样品浓度可在 100 pg/μL 至 1000 ng/μL 之间变化；然而，在用 QuDye dsDNA BR 染料工作溶液稀释后，DNA 的量应对应于 Qubit™ 荧光计的测量范围（200 μL 测试样品中 2–1000 ng DNA）。因此，具有可接受的最低初始 DNA 浓度 (100 pg/μL) 的样品应稀释 10 倍至 10 pg/μL [将 180 μL 染料工作溶液和 20 μL 样品 (100 pg/μL) 放入试管，相当于 2 ng DNA]。具有最大可接受初始 DNA 浓度 (1000 ng/μL) 的样品应稀释 200 倍 [将 199 μL 染料工作溶液和 1 μL 样品 (1000 ng/mL) 放入测定管中，相当于 1000 ng DNA]。但是，在稀释初始样品时避免使用太小的体积，以保持测量的准确性和精密度。
5. 在室温下将所有试管（含标准品和 DNA 样品）孵育 3-5 分钟。
6. 执行荧光测量。

使用 Qubit™ 荧光计进行荧光测量

接下来的步骤应根据 Qubit™ 荧光计的手册进行。本手册适用于 Qubit™ 荧光计 2.0 版。根据荧光计的版本，菜单项可能与下面指定的不同。

1. 在 Qubit™ 荧光计的主屏幕上，选择DNA作为检测类型，然后选择dsDNA Broad Range。
2. 软件将自动切换到标准选项卡。建议在准备新的染料工作溶液时运行荧光计校准。如果所有实验条件（包括实验室温度）保持不变，您可以使用之前执行的校准。在这种情况下，按“标准”选项卡上的“否” ，软件将切换到“样品”选项卡以测量实验样品的荧光。进行第 3 项。
    
   要运行新的校准，请在“标准”选项卡中按“是” 。将含有Standard #1的试管插入样品室，盖上盖子，然后按Read。读取完成后（约 3 秒），移除Standard #1。将含有Standard #2的试管插入样品室，盖上盖子，然后按Read。读取完成后，移除Standard #2。校准完成后，软件将进入样品选项卡以测量实验样品的荧光强度。
3. 在Sample选项卡中，将装有实验样品的试管插入样品室，合上盖子，然后按Read。测量完成后，软件将在屏幕上显示 QF 值。
    
   QF 值是测定管中初始样品稀释后的 DNA 浓度。使用公式计算初始 DNA 浓度：
    
   初始样品中的 DNA 浓度 (µg/mL) = QF 值 × 200/V，其中
    
   • V (µL) 是添加到分析管中的初始样品的体积 (1–20 µL)；
   • QF 是荧光计屏幕上的测量结果 (µg/mL)。
    
   对所有实验样品重复该过程。
    
   要计算初始样本中的 DNA 浓度，您还可以使用荧光计中的“稀释计算器”。