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血清免疫球蛋白(Ig)测定
血清免疫球蛋白(Ig)的测定是检查机体体液免疫功能最常用的方法之一。测定血清中Ig的含量,一般常用单向琼脂扩散试验,即在含有相应Ig抗体的琼脂板内,加入待测的血清样品进行单向扩散,在含量适当的情况下,抗原抗体复合物所形成的沉淀环直径大小与样品中Ig的含量成正比。根据沉淀环的大小,从标准曲线中即可算出血清中Ig的含量。
测定人血清中IgG、IgA和IgM含量。
待检血清Ig测定(样品测定)
待检血清的稀释:取待检血清IgG稀释50倍。IgA稀释10倍, IgM稀释4倍
加样:测IgG、A、 M各取待检稀释血清10微升,分别加入G、A、M板孔中放置于湿盒中,置37℃温箱,反应时间IgG为24小时,IgA,M为48小时。
(3)测定沉淀环直径,直接查IgG、A、M标准含量表即可。
注意:本扩散板4℃保存,绝对不允许冷冻保存或与冷冻冰块同时保存,如因此出现问题后果自负。



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文献和实验抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig 分五类,即 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的,有 κ(kappa)和 λ(Lambda)两种型别。五类 Ig 的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ(gamma)链和 μ(mu )链。 重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序
precipitation reaction),如梅毒血清检验中的康氏(Kahn)及克莱氏(Kline)试验以及检测白喉杆菌毒力的体外试验-Elek氏试验,检测毒素或类毒素的絮状沉淀单位测定等。本实验主要介绍凝胶中的沉淀反应。(一)单向免疫扩散(Single immunodiffusion)——人群血清IgG正常值测定一、基本原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔,并在孔中加入定量的抗原,当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合,即形成白色沉淀环,其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线,即可用以定量检测
单向琼脂扩散试验(Single immunodiffusion test)
2、稀释参考血清及待检血清:参考血清用0.5ml蒸馏水溶解后使用,参考血清、待检血清稀释按要求进行。 3、加样:将上述稀释参考血清分别滴入相应的抗体免疫板的一排孔内,其余孔滴加待检的稀释血清,每个检样加两个孔,每孔滴加10微升。 4、扩散:将免疫板置水平湿盘内,放进37℃温箱,IgG免疫板扩散24小时,IgA、IgM板48小时后取出置黑色背景前观察结果,(如果沉淀环不清晰,也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小时后观察),必要时可以染色后观察。 5、绘制标准曲线及血清标本中IgG、IgA











