利士曼原虫感染检查方法
1.一般检查:
内脏利什曼病患者血常规大多有不同程度白细胞系、红细胞系和血小板系下降,其中贫血最为常见(>90%),骨髓象提示白细胞毒性变、巨核细胞成熟障碍、缺铁性贫血,而外周血多克隆性丙种球蛋白显著升高则为其特征性的实验室检查特点之一。
2.病原学检查:
骨髓、淋巴结和脾脏穿刺液镜检仍是内脏利什曼病最可靠的确诊方法。通过吉姆萨染色可见细胞质呈淡蓝色,细胞核和动基体呈紫色的无鞭毛体。脾脏穿刺液诊断价值最高(特异度和敏感度均>90%),其次为骨髓(敏感度53%~86%)和淋巴结(敏感度53%~65%)。皮肤病灶镜检或培养敏感度较低(15%~70%),结合免疫荧光技术可提高检出率。各种基于PCR的检测方法显示出良好的应用前景,如取材得当,敏感度和特异度接近100%,并且可以进行种属鉴定。因此在皮肤利什曼病等活组织检查标本中原虫数量较少的情况下宜采用PCR明确诊断[4]。但目前国内缺乏适用的商用试剂盒,分子诊断尚未广泛开展。
3.特异性抗体检查:
血清学检查是目前诊断利什曼病,尤其是内脏利什曼病的重要方法,其中以基于rK39抗原的快速检测应用最为广泛,在国内也广为应用。K39是从恰氏利什曼原虫(Leishmaniachagasi)中分离出的一段含39个氨基酸的保守序列,并且发现其在杜氏利什曼原虫、婴儿利什曼原虫等易造成内脏利什曼病的种属中以保守抗原的形式存在,其基因片段重组抗原即rK39。ELISA或免疫层析法都是检测循环中针对rK39的IgG抗体的可靠手段。目前我国使用基于rK39的抗体检查,诊断内脏利什曼病的敏感度(97%~100%)和特异度(83%~85%)均很高[3],且已经有了商业化检测试纸,操作简单、价格低廉,易于在基层开展。抗体检查的缺点是不能鉴别治疗后疾病是否复发,且在高度流行区域,不能区分现症者和无症状感染者。因此,在流行区仅有rK39阳性而无临床症状不能作为诊断依据。对于HIV感染者,因其免疫缺陷,抗体检查阴性时不能排除利什曼原虫感染,应进行其他检查。在不能获得该项检查的医院可以与当地CDC联系,以进行进一步的检测。
4.抗原检测与分子生物学检测:
乳胶凝集试验(latex agglutination test)检测尿中原虫抗原特异性较好,但敏感度差异较大(35.8%~100.0%),适合在HIV感染者中应用。分子生物学检测可选择PCR,但供选择的成熟技术较少,有文献报道用二代测序等方法成功诊断骨髓穿刺与活组织检查未能发现的病例,将来有可能应用于临床。
来源:《中华传染病杂志》编辑委员会. 中国利什曼原虫感染诊断和治疗专家共识 [J] . 中华传染病杂志,2017,35 (9): 513-518. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2017.09.001