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De*trinBeads6FF
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北京索莱宝科技有限公司
1*1mL
Dextrin Beads 6FF 的预装柱说明书货号:YA2511规格:1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL保存:2-8℃产品说明: Dextrin Beads 6FF 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质。MBP 可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。DextrinBeads 6FF 可以一步纯化 MBP 融合蛋白,结合的融合蛋白可以用 10mM 麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性。如果要去除 MBP 融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。纯化流程:1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。平衡/ 洗杂液:20mM Tris-HCl,200mM NaCl,1mM EDTA,pH7.4洗脱液:20mM Tris-HCl,1mM EDTA,10mM 麦芽糖,pH7.4注意: 平衡液和洗脱液中可加入 1mM DTT 或 10mM β–巯基乙醇2、样品准备样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。3、样品纯化1)上柱:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中,打开下出口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。2)水洗:用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。3)平衡:使用至少 5 倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。4)利用泵或样品环上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。5)洗杂:用洗杂液冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少 10-15 个柱体积)。6)洗脱:使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱,收集洗脱液,即目的蛋白组分。7)水洗:依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4℃保存,防止填料被细菌污染。4、SDS-PAGE 检测将纯化过程中收集的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用 SDS-PAGE检测纯化效果。在位清洗Dextrin Beads 6FF 纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,需要进行在位清洗操作(Cleaning-in-Place,CIP)。1) 3 倍柱体积的去离子水;2) 3 倍柱体积的 0.1% SDS 或 0.5M NaOH 溶液;3) 3 倍柱体积去离子水,20%乙醇 2-8 度保存。
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