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rProteinGBeads4
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北京索莱宝科技有限公司
1*1mL
rProtein G Beads 4FF 的预装柱说明书货号:YA2451规格:1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL保存:2-8℃产品说明: rProtein G Beads 4FF 是用于分离和纯化 IgG 的亲和层析介质。Protein G 是一种分离自 GStreptococci 的细胞壁蛋白,它可通过其 Fc 片段结合哺乳动物 IgG。重组 protein G 含有高亲和结合位点,减少了非特异性吸附。Protein G 和 Protein A 有不同的 lgG 结合特性,相比 Protein A, ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与 Protein A 很好结合的大鼠 lgG、人 lgG3 和小鼠 lgG1。 rProtein G Beads 4FF 是以高度交联的 4%琼脂糖凝胶为基质,可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。纯化流程:1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。平衡/洗杂液:: 20 mM Na2HPO4,0.15M NaCl,pH 7.0洗脱液::0.1M 甘氨酸,pH 3.0中和液:1M Tris-HCl,pH8.52、样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值,可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗杂液透析。样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。3、样品纯化1. 上柱:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。2. 水洗:用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。3. 平衡:使用至少 5 个柱床体积的平衡液平衡色谱柱。备注:此步骤用于平衡介质,保证介质中的溶液的组分和 pH 与样本一致。4. 利用泵或注射器上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。5. 洗杂:用洗杂液冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少 10-15 个柱体积)。6. 洗脱:使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱,收集洗脱液,即目的蛋白组分。洗脱组分需要立即调成中性,一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和7. 水洗:依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4℃保存,防止填料被细菌污染4、SDS-PAGE 检测将纯化过程中收集的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用 SDS-PAGE检测纯化效果。填料清洗rProtein A Beads 4FF 可以重复使用而无需再生,但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。1. 去除一些沉淀或变性物质用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH 7.4 清洗。2. 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% TritonX-100 清洗,然后然后立即用 5 倍柱体积PBS, pH 7.4 清洗。
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