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Octyl-Sepharose
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北京索莱宝科技有限公司
1x1mL
Octyl-Sepharose 4FF 的重力柱说明书货号:YA2610规格:1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL保存:2-8℃产品说明: Octyl-Sepharose 4FF 属于脂肪族疏水作用介质,配基通过不带电和化学性质十分稳定的醚键连接到琼脂糖微球上。疏水层析介质主要通过分子表面疏水性差别进行分离纯化。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质和多肽的分离纯化。纯化流程:1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。平衡/洗杂液:0.05M 磷酸盐,1.7M 硫酸铵,pH7.0洗脱液:0.05M 磷酸盐,pH7.0注:疏水层析介质缓冲液可根据不同介质及纯化物质不同做适当改变,原则上高盐上样低盐洗脱。2、样品准备样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。样品中盐浓度跟平衡液相同,通常为 0.5-2.0M 硫酸铵。3、样品纯化Octyl-Sepharose 4FF 重力柱使用请参考以下说明,各溶液用量均按照柱体积计算(柱体积是指填料体积)。1)水洗:将Octyl-Sepharose 4FF 重力柱固定在铁架台上,依次去掉上端塞和下端塞,使液体流出。当柱内剩余液面略高于上筛板,向管中加入 5-10 个柱体积的去离子水,去除残留的保护液。2) 平衡:当液面略高于上筛板,向柱管中加入 5 个柱体积的平衡液,进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。3) 上样:将样品加到平衡好的重力柱中,样品保留时间至少 2min,保证目的蛋白与介质充分接触,提高目的蛋白的回收率。收集流出液,用于 SDS-PAGE 分析蛋白质的结合情况,在出现问题时,更方便寻找解决问题的方案。4) 洗杂:用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。5) 洗脱:使用 5-10 倍柱体积的洗脱液进行目的蛋白的洗脱,分段收集,每一个柱体积收集一管,分别检测,既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱,又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。注:疏水作用随着温度的降低而降低。可采用非极性有机溶剂如 40-50%乙二醇、30%异丙醇或 1% 去污剂(Triton X-100)洗脱。6)水洗:依次使用 2-3 倍柱体积的 30%异丙醇和 5-10 倍去离子水清洗,最后再用 5 倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4℃保存,防止填料被细菌污染。4、SDS-PAGE 检测将纯化过程中收集的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用 SDS-PAGE检测纯化效果。填料清洗CIP(Cleaning-In-Place)清洗疏水层析树脂可以重复使用,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行 CIP 清洗。A、去除一些沉淀或变性物质,建议使用下面的方法用 2 倍柱体积的 1M NaOH 溶液进行清洗(至少浸泡 4 小时),用 5-10 倍柱体积的去离子水清洗。B、去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 3-4 倍柱体积的 1% TritonX-100 的 0.1M 醋酸盐清洗(至少 1-2 小时),用 5-10 倍柱体积的去离子水清洗。
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