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rProteinLBeads4
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北京索莱宝科技有限公司
1x1mL
rProtein L Beads 4FF 的重力柱说明书货号:YA2480规格:1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL保存:2-8℃产品说明: rProtein L Beads 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质。Protein L 经过基因重组,由大肠杆菌表达,保留了与抗体κ链结合的特性,同时不会 影响抗体的抗原结合位点。Protein L 与人、小鼠的 kappa 轻链有较好的结合力,也可能与其他物种的某些 kappa 亚型有特异性结合。Protein L 与兔免疫球蛋白结合力很弱,不结合 牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。 rProtein L Beads 4FF 是以高度交联的 4%琼脂糖凝胶为基质,可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。纯化流程:1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。平衡/ 洗杂液: 0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH 7.0洗脱液: 0.1M 甘氨酸,pH 3.0中和液:1M Tris-HCl,pH 8.52、样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值,可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。3、样品纯化 rProtein L Beads 4FF 重力柱使用请参考以下说明,各溶液用量均按照柱体积计算(柱体积是指填料体积)。1) 水洗:将 rProtein L Beads 4FF 重力柱固定在铁架台上,依次去掉上端塞和下端塞,使液体流出。当柱内剩余液面略高于上筛板,向管中加入 5-10 个柱体积的去离子水,去除残留的保护液。2) 平衡:当液面略高于上筛板,向柱管中加入 5 个柱体积的平衡液,进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。3) 上样:将样品加到平衡好的重力柱中,样品保留时间至少 2min,保证目的蛋白与介质充分接触,提高目的蛋白的回收率。收集流出液,用于 SDS-PAGE 分析蛋白质的结合情况,在出现问题时,更方便寻找解决问题的方案。4) 洗杂:用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。5) 洗脱:使用 5-10 倍柱体积的洗脱液进行目的蛋白的洗脱,分段收集,每一个柱体积收集一管,分别检测,既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱,又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。洗脱组分需要立即调成中性,一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。6) 水洗:依次使用 3 倍柱体积的平衡液和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料。将重力柱保存在等体积的 20%乙醇中,置于 2-8°C 保存,防止填料被细菌污染。4、SDS-PAGE 检测将纯化过程中收集的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。5、填料清洗 rProtein L Beads 4FF 可以重复使用而无需再生,但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。1.去除一些沉淀或变性物质 用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH 7.4 清洗。2.去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% TritonX-100 清洗,然后然后立即用 5 倍柱体积的 PBS,pH 7.4清洗。
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