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- S9390-25ml
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
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- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- 规格：
25ml
货号：S9390
规格：25mL
保存: 在20%乙醇中，4℃下长期保存。
产品简介：
苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上，可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。
苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。
亲和填料特征：
| 特点 | 载量大，分辨率好，流速高，使用方便。 |
| 基质 | 6%的交联琼脂糖凝胶 |
| 配基 | 苯甲脒 |
| 配基密度 | 7μmol /ml |
| 吸附载量 | 13 mg胰蛋白酶/ml |
| 填料的颗粒大小 | 45-165μm |
| 最大流速 | 300cm/h |
| pH范围 | 3-10，在位清洗时pH范围可到2-11 |
| 保存温度 | +4~8℃ |
| 保存液体 | 20%乙醇 |
一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。
应用实例:
实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶6B分离尿激酶。
实验步骤：
- 苯甲脒琼脂糖凝胶6B装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml
- 用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min
- 取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45μm的滤膜过滤，上样，流速为1ml/min
- 用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min
- 最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。
- 用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl和100mM，pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇冲洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。
也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类蛋白酶。例如去除凝血酶上样缓冲液为：50mM pH7.4的PBS缓冲液含0.15M NaCl,洗脱缓冲液为：50mM pH7.4的PBS缓冲液含1M NaCl。
应用的注意事项：
- 色谱柱装填
- 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
- 在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。
- 将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。
- 柱压不超过0.3MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则控制流速高于300cm/h，但是在使用中一般只用最大流速的75%。
- 蛋白的结合
- 蛋白的洗脱
- 洗脱可以采取特异性或者非特异性洗脱。
- 特异性洗脱可以用目标分子的竞争剂，对氨苯甲脒的抑制剂。对非特异性洗脱而言，可以选用以下几种方法：
b 改变pH，可采用阶段洗脱洗脱或线性梯度洗脱来达到目的。
c 降低洗脱缓冲液的极性。如可以在洗脱缓冲液中加入10%的二氧六环等。
d 使用变性剂。如在洗脱缓冲液中加入尿素、盐酸胍等。
再生、清洗:
-
- 再生
如果在色谱操作过程中用到了变性剂或者去污剂，也可以用上述方法洗柱子。
- 清洗
注意事项：
上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
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文献和实验SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中 分离
。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF或苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离。 (三) 白A融合蛋白可以用IgG琼脂糖凝胶FF分离。 (四) 涵体蛋白的色谱复性: 离子交换和疏水色谱都在包涵体复性中有很好的效果，金属螯合色谱填料等亲和色谱填料也常用于带HIS标签融合蛋白的色谱复性。 8. 疫苗的纯化 疫苗可以用琼脂糖凝胶FF分离。 9. DNA疫苗的纯化 DNA疫苗要求超螺旋DNA含量大于90%，用DNA纯化琼脂糖凝胶FF就可以专门用于各种结构的DNA的分离，一步色谱后超螺旋含量可大于90
到纯化的问题，大大简化了纯化的步骤，但还是会遇到些实际的问题，所以需要详细阅读使用说明和注意事项。(一)HIS 标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF 分离，色谱填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，吸附载量更高，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的最佳工具。(二)ST 融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s 转酶，很方便用GST 琼脂糖凝胶FF 分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF 或苯甲脒琼脂糖凝胶FF 分离。(三)白A 融合
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