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免疫组化 点击咨询服务及报价》》
免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
LabEx提供从组织处理、包埋、切片、染色、扫描、分析整体服务!
多重免疫组化(mIHC)
【技术原理】
多重荧光免疫组化,主要的技术原理来自TSA技术,TSA即酪酰胺信号放大技术(Tyramide signal amplification),是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。
简单来说,用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素),来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化,跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联,使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波处理,前一轮非共价结合的抗体被洗掉,共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育,周而复始。等到所有抗体孵育结束,荧光素都结合好后,最后去检测结果。
【技术优势】
1.由于每次体系中都只有单一抗体孵育,因此无需担心抗体交叉反应,以及一抗二抗种属匹配问题,大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
2.TSA技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的敏感度、检测极微量的目的抗原。极大的降低抗体的用量,节约抗体,实测确实可以显著提升抗体的稀释比例。
【多色服务】
* 我们可以提供的服务:
多重荧光免疫组化服务提供预实验验证-染色-拍照-分析全过程。
最多六指标七色(含DAPI)的多色免疫组化服务(芯片最多四指标五色),样本涵盖石蜡切片、冰冻切片及组织芯片(TMA),组织大片请提供单块组织切片,FFPE样本,厚度3-5um。正式实验最好每例2张,1张备用。预实验样本数量根据预实验方案定。
(* 所有抗体指标需要您提供)
* 我们可以提供的服务结果:
1.五色及以下提供全片200X(相当于物镜20X,目镜10X)原图,六七色提供指定视野200X图片,选定视野一般默认3视野,超过视野单独收费,收费标准根据具体情况订,提供看图软件可在客户端打开。数据上传网盘1G以内,或用U盘寄送1G以上。
2.客户指定区域的单细胞分析结果:
单阳性细胞占有核细胞百分比,密度。
双阳性细胞占有核细胞百分比,密度。
组织面积和特定病理形态面积计算。
TMA提供每个芯点的以上定量结果。
【企业资质】
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