Kasumi-1 人红白血病细胞

　　细胞介绍

　　人急性髓母白血病细胞，该细胞复苏后需要两周左右恢复正常生长。

　　STR结果如下：D5S818:9,11；D13S317:11,13；D7S820:8,11；D16S539:9,12；vWA:14；THO1:6,9；Amelogenin:X；TPOX:8,9；CSF1PO:10,12

　　细胞特性

　　1）来源：红白血病细胞，

　　2）形态：原粒细胞，悬浮生长

　　3）含量：>1x106细胞数

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　5）用途：仅供科研使用。

　　运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理：

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，20%；GlutaMAX-1谷氨酰胺(iCell-0900)1%，SodiumPyruvate丙 ，酮酸钠(iCell-01100)1%，双抗，1%。

　　注意事项：

　　a)该细胞复苏后成活率较低，会出现大量死细胞和死细胞碎片，培养两周后有所好转。建议每1-2周对细胞进行1000rpm,5mins离心，弃掉上清，加入新鲜完全培养液，可以去掉部分细胞碎片和颗粒。培养过程中会出现死细胞和细胞碎片，收到邮寄的活细胞的用户若发现培养物内有部分死细胞和细胞碎片，此为正常现象。

　　b)细胞培养过程中会有轻微聚团，轻轻吹打开即可。当细胞密度较大或者培养液变黄时，需要及时进行半换液或者完全换液。

　　c)该细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。

　　d)请注意保持细胞密度在合适的范围（3x105~3x106/ml），不能过稀。

　　2)培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。