- ￥2750
- YLKBIO
- YLK-PCR0321
- 国产
- 2025年11月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
- 产品说明
本试剂盒适用于牛血液，睾丸、脑组织、肺脏、肾脏以及各类淋巴结等样品中牛免疫缺损病毒的特异检测，适用于
牛免疫缺损病毒(BIV)的辅助诊断、监测及流行病学调查，检测结果仅供临床参考，检出限为 101copies/μl基因组RNA。
-
产品组成（50 测试）
试剂 含量
1000μL × 1 支
PG-BIV-P 100μL × 1 支
- 适用仪器
- 自备耗材和仪器
- 注意事项
- 第一区：试剂准备区。
- 第二区：样本制备区。
- 第三区：模板添加区
- 第三区：扩增及产物分析区。
- 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
- 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
- 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30
- 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
- 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
- 本试剂盒仅供研究使用，不用于临床诊断。
- 样品处理
采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。
样品采集后，放入密闭的塑料袋（一个采样点的样品放一个塑料袋），置保温箱中加冰、密封，24小时内送到 实验室。
2.样品处理
液体样品可直接用于核酸提取；其他组织样品，用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品2g-5g 组织样品切成小块， 于研钵中充分研磨，加 5mL-15mL 生理盐水进行匀浆，制成悬液，5000r/min 离心 1min 取200μL 上清液进行提取。
- 样品存放
- 实验操作
- 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
| 试剂 | 使用量 |
| A-BIV-P | 20×(N+2)μL |
| 反应液总体积 | 20×(N+2)μL |
-
- 模板制备（样本制备区）
-
- 添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
-
- 扩增反应（扩增及产物分析区）
| PCR 循环 | 荧光收集位点 | ||
| 50℃ | 10 分钟 | 1 个循环 | — |
| 95℃ | 1 分钟 | 1 个循环 | — |
| 95℃ | 15 秒 | 45 个循环 |
— |
| 60℃ | 45 秒 | ※ | |
进行软件设置时，为目标基因BIV设置荧光通道，基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过
阴性对照扩增曲线的最高点。
- 结果判定
测试样品检测 Ct值≤40，曲线呈“S”型扩增曲线，可判定样品含有牛免疫缺陷病毒（BIV）；
测试样品检测 Ct值 40＜Ct＜45，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR。再次扩增后的样品检测Ct值＜45，则可判定样品含有牛免疫缺陷病毒（BIV）；再次扩增后的样品检测 Ct 值≥45，则可判定该样品不含有牛免疫缺陷病毒
（BIV）或含量低于检出限。
★ NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
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文献和实验1、慢病毒载体概况 慢病毒是逆转录病毒科亚科之一，分为两类：灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括HIV-1、HIV-2、猴免疫缺陷病毒( SIV)，非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、马免疫缺陷病毒(EIAV)等。 多项研究表明慢病毒载体具有可感染非分裂期细胞、可长期表达、而且宿主细胞免疫反应小、细胞毒性小等优点。因其自身结构特点，可包装8～lOkb，适用于多基因表达系统，而且基因组包含较少的核苷酸，抵抗基因沉默能力较强，宿主体内更以
及基因重排分析等方面有重要的参考价值。 7.核酸探针杂交: 首先从标本中提取病毒dsRNA，其可在溶液中或在固相支持物上(如NC膜或尼龙膜)，与其互补的P2标记的DNA或RNAprobe进行杂交，通过检测标记的probe观察是否有阳性杂交反应，杂交的敏感性与prebe序列的长度成正比。 8.聚合酶链反应(PCR):PCR自1985年由美国Cotus公司的Saiki等研究成功后，已被大量地用于检测人体内病毒核酸序列，具有敏感特异，简便和快速等优点，针对RV苯-基因的保守序列，合成两个引物
的。 相关实验： （1）端粒酶活性检测 PCR-ELISA 端粒酶检测法 细胞周期的测定 （2）mRNA 表达水平的检测 实时荧光定量 PCR（realtimePCR） 8. 2008 年，德国科学家哈拉尔德·楚尔·豪森及法国科学家弗朗索瓦丝·巴尔-西诺西和吕克·蒙塔尼。豪森发现了人乳头状瘤病毒 (HPV)，这种病毒是导致宫颈癌的罪魁祸首。巴尔-西诺西和蒙塔尼的获奖成就则是发现
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