牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

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  • ¥2750
  • YLKBIO
  • YLK-PCR0319
  • 国产
  • 2025年11月05日
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    • 详细信息
    • 技术资料
    • 库存

      100

    • 英文名

      /

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      优利科(上海)生命科学有限公司

    • 保存条件

      -20℃

    • 规格

      50T

    • 产品说明
    本试剂盒适用于牛血液,阴道分泌物、牛奶和粪便、肌肉、关节液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、    乳腺以及各类淋巴结等样品中牛白血病病毒的特异检测。结果仅供临床参考,检出限为 101copies/μl基因组RNA。

    产品组成(50 测试)                           036162M                          

    试剂             含量

     
    A-BIV-P

    1000μL × 1 支
     
    NG-P                     100μL × 2 支
    PG-BIV-P                   100μL × 1 支


    牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

    • 适用仪器
    ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene 9600 等实时荧光 PCR 仪。
    • 自备耗材和仪器
    ①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④均质机、搅拌机    或研钵等研磨器具;⑤电子天平;⑥涡旋混匀器;⑦金属浴
    • 注意事项
    1本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
    1. 第一区:试剂准备区。
    2. 第二区:样本制备区。
    3. 第三区:模板添加区
    4. 第三区:扩增及产物分析区。
    ★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。
    1. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
    2. 严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
    3. 反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30
    秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
    1. 反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
    2. 不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
    3. 本试剂盒仅供研究使用,不用于临床诊断。
    • 样品处理
    参照相关标准采集样品,短期保存于 -20℃,长期保存请放置于 -80℃。1.样品的采集、处理和保存
    采样过程中样本不得交叉污染,采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。
    样品采集后,放入密闭的塑料袋(一个采样点的样品放一个塑料袋),置保温箱中加冰、密封,24小时内送到    实验室。
    2.样品处理
    液体样品可直接用于核酸提取;其他组织样品,用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品2g-5g 组织样品切成小块, 于研钵中充分研磨,加 5mL-15mL 生理盐水进行匀浆,制成悬液,5000r/min 离心 1min 取200μL 上清液进行提取。
    1. 样品存放
    采集或处理好的样品在2℃-8℃条件下保存应不超过24小时;若需长期保存,须放置-80℃冰箱,但应避免反复    冻融(冻融不超过3次)。
    牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
    • 实验操作
      1. 试剂配制(试剂准备区,放置于冰盒中进行):
    若有 N 个待检样品,则参照下表,按照 N+2 个数量计算各组分用量(N 个待检样品+1 个阴性对照 NG+1 个阳性对照 PG),涡旋混匀,离心 30 秒,分装于 0.2ml PCR 管中。
    试剂 使用量
    A-BLV-P 20×(N+2)μL
    反应液总体积 20×(N+2)μL
      1. 模板制备(样本制备区)
    建议使用商品化病毒 DNA/RNA 提取试剂盒等商品化试剂盒,具体过程详见产品说明书。
      1. 添加模板(样本制备区,放置于冰盒中进行)
    在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中分别加入 5μl 模板,顺序为阴性对照 NG、待测样品模板、PG-BLV-P。盖好配套的PCR盖管后,涡旋混匀30秒,离心1min,立即进行PCR扩增反应。
      1. 扩增反应(扩增及产物分析区)
    使用荧光定量 PCR 仪,BLV荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择
    NFQ-MGB。按下列条件设置扩增反应:

     
    PCR 循环 荧光收集位点
    50℃ 10 分钟 1 个循环
    95℃ 1 分钟 1 个循环
    95℃ 15 秒
    45 个循环
    60℃ 45 秒
    其他仪器请参照仪器说明书进行设置。5.基线和阈值设定
    进行软件设置时,为目标基因BLV设置荧光通道,基线调整取 3-15 个循环的荧光信号,阈值线应超
    过阴性对照扩增曲线的最高点。

     
    • 结果判定
    测试样品检测 Ct 值≥45或无 Ct 值,曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,可判定样品不含有牛白血病病毒(BLV)或含量低于检出限;
    测试样品检测 Ct值≤40,曲线呈“S”型扩增曲线,可判定样品含有牛白血病病毒(BLV);
    测试样品检测 Ct值 40<Ct<45,应调整模板浓度,重做实时荧光PCR。再次扩增后的样品检测Ct值<45,则可判定样品含有牛白血病病毒(BLV);再次扩增后的样品检测 Ct 值≥45,则可判定该样品不含有牛白血病病毒
    (BLV)或含量低于检出限。
    ★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。

    牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)


    牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

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