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- YLKBIO
- YLK-PCR0264
- 国产
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
CP4-EPSPS Probe PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
CP4-EPSPS 是从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测 CP4-EPSPS 的试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
- 根据 CP4-EPSPS 保守区域设计引物和探针， 能专一性地检测出样品中的
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
规格及成分
| 成分 | 包装 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 1 mL（棕色盖） |
| 荧光PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| CP4-EPSPS 转基因元件探针法qPCR 引 物混合液 |
100 uL（白盖） |
| CP4-EPSPS 转基因元件qPCR 探针 | 50 uL（棕色管） |
| CP4-EPSPS 转基因元件探针法qPCR 阳 性对照（1×10E8 拷贝/uL） |
50 uL（黄盖） |
| 核酸释放剂试用装 | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较
高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
自备试剂
DNA 模板
使用方法
稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本
试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
- 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的核酸释放剂试用装，可向客服索取说明书。
设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
- 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照（用第一步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：
-
成分 样品管
N+2 个PCR 阴性
对照管标准曲线
样品管（2-7 管）2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL CP4-EPSPS 转基因元件探针法
qPCR 探针1 μL 1 μL 各 1 μL CP4-EPSPS 转基因元件探针法
qPCR 引物混合液2 μL 2 μL 各 2 μL N+2 个待测样品 DNA 模板 7 μL 不加 不加 超纯水 不加 7 μL 不加 第 7 步所得标准曲线样品稀释液
（2-7 号）
不加
不加各 7μL（2 号样到 2
号管，3 号样到 3 号管…）
qPCR 反应参数
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预热 | 50℃ | 2 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
95℃ | 30sec |
| 60℃ | 60sec（采集 FAM 通道的荧光信号） |
数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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