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- YLKBIO
- YLK-PCR0256
- 国产
- 2026年04月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
EB Virus SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV，EB 病毒）是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，基因组为 DNA。EB 病毒具有在体内外专一性地感染人类及某些灵长类B 细胞的生物学特性。人是 EB 病毒感染的宿主，主要通过唾液传播。无症状感染多发生在幼儿，3～5 岁幼儿 90%以上曾感染 EB 病毒，90%以上的成人都有病毒抗体。 EB 病毒是传染性单核细胞增多症的病原体，此外 EB 病毒与鼻咽癌、儿童淋巴瘤的发生有密切相关性，被列为可能致癌的人类肿瘤病毒之一。本公司开发 EBV 染料法荧 光定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
- 引物根据 EB 病毒专一区设计，特异性高。
- 荧光定量PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR Magic Mix | 500 μL（棕色管） |
| 荧光PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| EB 病毒染料法 qPCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| EB 病毒染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
DNA 模板、超纯水、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法
稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
- 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
- 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
- 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品，1 个用于PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 14810 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤， 定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕
- 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）
成分 样品管
N+2 个PCR 阴性
对照管PCR 阳性
对照管（2-7 管）2×qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL EB病毒染料法qPCR 引物混
合液2 μL 2 μL 各 2 μL 自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL N+2 待测样品 cDNA 模板 6 μL - - 自备超纯水 - 6 - 第 7 步所得 PCR 阳性对照稀释液（2-7 号）
-
-各 6μL（2 号样到
2 号管，3 号样到 3
号管…）
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 36。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 34 则为阴性，如果小于或等于 30 则为阳性。如果在 30-34 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 34，扩增曲线有
- 明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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文献和实验In Situ Detection of Epstein-Barr Virus DNA and Viral Gene Products
Primary Epstein-Barr virus (EBV) infection is followed by a life-long persistence of the virus in the B-cell compartment of the host (1 ,2 ). Small numbers of EBV-carrying B cells have been identified in the peripheral blood
We describe a two-step RT-PCR method for simultaneous detection of EBNA-1 (QK and Y3K splice variants), EBNA-2 , LMP-1 , LMP-2a and -2b, ZEBRA , and BARTs RNA encoded by Epstein-Barr virus. As a control for RNA integrity, the low-copy-number
The method described in this chapter uses limiting dilution analysis in conjunction with RT-PCR to determine quantitatively what percentage of EBV-infected cells within a given population are expressing the viral genes EBNA-1 Q-K, EBNA
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