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- YLKBIO
- YLK-PCR0255
- 国产
- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Varicella-Zoster Virus(VZV) SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
水痘-带状疱疹病毒(Varicella-Zoster Virus，VZV) 是一种儿童初次感染引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数病人在成人后病毒再发而引起带状疱疹的病毒。水痘是具有高度传染性的儿童常见疾病，多发于 2～6 岁，传染源主要是患者，患者急性期水痘内容物及呼吸道分泌物内均含有病毒。曾患过水痘的病人引起带状疱疹后， 初期局部皮肤有异常感，搔痒、疼痛，进而出现红疹、疱疹，串连成带状，以躯干和面额部为多见，呈单侧分布，病程约 3 周左右，少数可达数月之久，还有可能出现脑脊髓炎和眼结膜炎等并发症。该病毒对人体健康有长期潜在危害，且该病毒可以有效检测野生株和疫苗株，因此水痘-带状疱疹病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本公司开发水痘-带状疱疹病毒染料法荧光定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
- 引物根据水痘-带状疱疹病毒专一区设计，特异性高。
- 荧光定量PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR Magic Mix | 500 μL（棕色管） |
| 荧光PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 水痘-带状疱疹病毒染料法 qPCR 引 物混合液 |
100 μL（白盖） |
| 水痘-带状疱疹病毒染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
DNA 模板、超纯水、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法
稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得
- 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
- 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
- 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
- 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 10E4 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤， 定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕
| 成分 | 样品管 N+2 个 |
PCR 阴性 对照管 |
PCR 阳性 对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 水痘-带状疱疹病毒染料法 qPCR 引物混合液 |
2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | - | - |
| 自备超纯水 | - | 6 | - |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照稀释液（2-7 号） | - |
- |
各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
注:仅ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号） | |
| 按仪器预设程序进行熔解曲线分析 | ||
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 36。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 35 则为阴性，如果小于或等于 30 则为阳性。如果在 30-35 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 35，扩增曲线有
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction，PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。 无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运
1992 年，Higuchi 在一次报告中提出了实时荧光定量 PCR 技术。通过检测溴化乙锭的含量实时监控整个 PCR 反应的进程。之后经过不断的研究，通过对 PCR 反应的数学函数关系、相应的算法以及对标准品的运用，就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。 1996 年 1996 年 ABI 公司推出世界上第一台定量 PCR 仪 7700 型。设备由荧光定量系统和计算机组成，通过荧光染料或荧光探针，对 PCR 产物进行标记跟踪，结合相应的软件对结果进行分析，可以实现计算待测样品
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