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- YLKBIO
- YLK-PCR0254
- 国产
- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Human Herpesvirus-6(HHV-6) SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
人疱疹病毒 6 型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）是从淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴细胞中培养获得的一种新病毒，可通过唾液飞沫及密切接触（如接吻， 共用餐、饮器具等）、输血或器官移植传播。除免疫低下（如先天性免疫缺陷、艾滋病、长期服用免疫抑制剂等）外，绝大多数人感染后终身都不会产生明显症状；少数婴幼儿因免疫低下，感染可引起幼儿急疹，临床特征为急性发热、上呼吸道症状和皮疹，病程多为 3～5 天，预后良好，大多无后遗症；免疫低下者，如 HIV 感染者，当人体特异性免疫被削弱至一定程度时，潜伏的病毒可被激活并产生急性感染症状，此时会出现间质性肺炎、脑炎、脑膜炎、肝炎及多器官衰竭等症状，活化的病毒可大规模感染 T 淋巴细胞，使免疫功能进一步削弱，该病毒对人体健康有较大影响，因此人疱疹病毒 6 型通用的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，本公司开发人疱疹病毒 6 型染料法荧光定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
- 引物根据人疱疹病毒 6 型专一区设计，特异性高。
- 荧光定量PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
- 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
- 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
规格及成分
| 成分 | 塑料盒包装 |
| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） |
| 荧光PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 人疱疹病毒 6 型染料法 qPCR 引物混合液 |
100 μL（白盖） |
| 人疱疹病毒 6 型染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
DNA 模板、超纯水、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法
稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得
- 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 样品 DNA 的制备
- 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
- 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
- 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 10E4 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕
| 成分 | 样品管 N+2 个 |
PCR 阴性 对照管 |
PCR 阳性 对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 人疱疹病毒 6 型染料法 qPCR 引物混合液 |
2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | - | - |
| 自备超纯水 | - | 6 | - |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照稀释液（2-7 号） | - |
- |
各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
注:仅ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5 min PCR 反应
（40 个循环）95℃ 15 sec 60℃ 1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号） 按仪器预设程序进行熔解曲线分析
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 35 则为阴性，如果小于或等于 30 则为阳性。如果在 30-35 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 35，扩增曲线有
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文献和实验可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
【公告】丁香通试用中心：10月免费试用装精选（10月18日有更新）
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。目前被普遍使用的多种常规PCR方法如各种凝胶电泳PCR法，终点荧光定量法或PCR-ELISA法叫做终点PCR法。实时荧光定量PCR法最大的优点是克服了终点PCR法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差，实现DNA/RNA的精确定量。普通PCR技术发明于1983年，而实时荧光定量PCR技术发明于上世纪九十年代并于1996年生产出了世界上第一台实时荧光定量PCR仪，实时荧光定量PCR技术得以实现的技术要素主要有荧光定量PCR试剂盒和实时荧光定量PCR仪，我国荧光定量PCR试剂盒研发实力强大，生产厂家较多
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