- ￥2750
- YLKBIO
- YLK-PCR0252
- 国产
- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Herpes Simplex Virus(HSV) SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus，HSV)会引起单纯疱疹，是一种由单纯疱疹病毒所致的病毒性皮肤病，中医称为热疮。能引起人类多种疾病，如龈口炎、角膜结膜炎、脑炎以及生殖系统感染和新生儿的感染。在感染宿主后，常在神经细胞中建立潜伏感染，激活后又会出现无症状的排毒，在人群中维持传播链，周而复始的循环。单纯疱疹病毒在全球广泛分布，人群中感染极为普遍，潜伏和复发感染者较多。患者和带毒者是该病的传染源。病毒可通过皮肤、粘膜的直接接触或性接触途径进入机体，对人体健康造成严重损害，因此单纯疱疹病毒通用的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的单纯疱疹病毒通用染料法荧光定量 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
- 根据单纯疱疹病毒通用保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
- 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
- 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 单纯疱疹病毒通用 PCR 引物混合物 | 100μL（白盖） |
| 单纯疱疹病毒通用 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50μL（红盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法
稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
- 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
- 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
- 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）
成分 样品管
N+2 个PCR 阴性
对照管PCR 阳性
对照管（2-7 管）2×qPCR MagicMix
（棕色管）10 μL 10 μL 各 10 μL 单纯疱疹病毒通用 PCR
引物混合液（白盖）2 μL 2 μL 各 2 μL 自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL N+2 待测样品 DNA 模板 6 μL 不加 不加 第 7 步所得PCR 阳性对照稀释液（2-7 号）
不加
不加各 6μL（2 号样到
2 号管，3 号样到 3
号管…）
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
过程 温度 时间 预变性 92℃ 5 分钟
PCR 反应
（30 个循环）94℃ 60 秒 54℃ 60 秒 74℃ 60 秒
- 数据采集
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
的 microRNA； ● 超宽的线性范围，可跨越 7 个数量级。 实时定量 PCR 的系统构成及工作原理 荧光定量检测系统由实时荧光定量 PCR 仪，实时荧光定量试剂，通用电脑，自动分析软件等构成。设备由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。 与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平
可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
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