鸭源性成分(Duck)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

【产品名称】

通用名称：鸭源性成分(Duck)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)

Name ：Diagnostic Kit for Duck derived ingredients DNA（Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于动物组织以及食品、饲料等样本中鸭源性成分的检测。检测结   果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用 SB/T 10923-2012 中的鸭源性成分特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【试剂组成】

名         称	规         格
酶液	50μL×1 管
Duck 反应液	500μL×2 管
Duck 阳性质控品	50μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过 6 个月，标本运送应采用 0℃冰壶。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）
   1. 样本前处理：

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器
中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1. 2. DNA 提取

样本 DNA 的提取推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的 DNA 提取试剂
盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性
对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	Duck 反应液	酶液
用量	20μL	1μL

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）
   1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
   2. 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；荧光通道选择： 检测通道

（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。

1. 3. 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

5. 结果分析判定
   1. 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出

现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

0. 2. 判断
1. 检测通道 Ct 值≤30，有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，判断样品为阳性。
2. 当 30<Ct 值≤35 时，且有典型的扩增曲线时，则需重复实验。再次扩增后检测体系的Ct 值仍≤35，且有典型的扩增曲线，则判定该样品含有相应的动物源性成分。当再次扩增后，检测体系 Ct 值＞35，或无典型的扩增曲线，则判定该样品不含相应的动物源性成分。

6. 质控标准

1. 空白对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。
2. 阴性对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。
3. 阳性对照：有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ct 值＜30。
4. 以上应同时满足，否则本次实验无效。

 

7. 检测方法的局限性

• 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
• 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
• 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
• 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
• 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
• 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
• 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

 

【注意事项】

• 所有操作严格按照说明书进行；检验过程中，参照《GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》的规定进行。
• 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
• 反应液应避光保存；
• 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
• 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
• 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
• 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全   通则》进行处理。