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PC-12低分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞低分化

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  • CL-011r
  • 2026年03月31日
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      999

    • 物种来源

      大鼠

    • 细胞形态

      多角形

    • 运输方式

      常温/干冰

    • 生长状态

      贴壁生长

    • 规格

      1×10⁶cells

    一.细胞介绍

    该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。NGF可诱导产生神经表型。这些细胞不合成epinephrine。

    二.细胞特性

    (1)来源:肾上腺嗜铬细胞瘤

    (2)形态:多角形,贴壁生长

    (3)含量:>1x10⁶cells

    (4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

    (5)用途:仅供科研使用。

    三.培养基及培养冻存条件准备

    (1) 准备RPMI-1640   培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

    (2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

    (3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

    四.运输和保存

    (1)冻存细胞:1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

    (2)复苏好的活细胞:T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

     

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    细胞接收后的处理:

    (1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

    (2)请在4或5x显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

    (3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

    (4)注意:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。

    细胞处理:

    (1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

    (2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

    对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

    1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

    2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。

    3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

    (3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

    下面以T25瓶为例:

    (1)细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

    (2)1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

    (3)将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存,同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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    该产品被引用文献

    Greene L.A., Tischler A.S.
    Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor.
    Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 73:2424-2428(1976)

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