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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Human Bladder Epithelium Immortalized Cells
- 库存:
999
- 供应商:
-
- 肿瘤类型:
-
- 细胞类型:
详见说明书
- 品系:
详见说明书
- 组织来源:
详见说明书
- 相关疾病:
-
- 物种来源:
人
- 免疫类型:
详见说明书
- 细胞形态:
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞:
-
- 器官来源:
详见说明书
- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
详见说明书
- 生长状态:
详见说明书
- 规格:
1×10⁶cells
一.细胞介绍
SV-HUC-1人膀胱上皮永生化细胞正常输尿管组织用SV40病毒转染建株的。 反复用非洲绿猴肾细胞平板测试检测传染性SV40的生成,结果都呈阴性。
二.细胞特性
(1)来源:输尿管
(2)形态:上皮细胞 贴壁生长
(3)含量:>1x10⁶cells
(4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
(5)用途:仅供科研使用。
三.培养基及培养冻存条件准备
(1)准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
(2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
(3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
四.运输和保存
(1)冻存细胞:1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)复苏好的活细胞:T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
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细胞接收后的处理:
(1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
(2)请在4或5x显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
(3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
(4)注意:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
细胞处理:
(1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
(2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面以T25瓶为例:
(1)细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
(2)1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
(3)将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存,同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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文献和实验Characterization of human uroepithelial cells immortalized in vitro by simian virus 40.
Cancer Res. 47:6066-6073(1987)
腺病毒可以在293A细胞中进行转录,表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞,我做过也可进行表达,但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5)DNA的永生化细胞,表达转染的腺病毒5的基因。细胞来源都是人肧肾上皮细胞,293T细胞表达E1A蛋白,SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293FT细胞能制造高滴度的慢病毒。293A细胞来源于人肾纤维母细胞,组成性表达E1A 和E1B 蛋白
有64 条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞der(1)t(1;15)(q42;q13),der(19)t(3;19)(q12;q13),der(12)t(8;12)(q22;p13),还有四条标记染色体,有的细胞另有5条标记染色体。der(1)与M8 (or Xq+)常常成对出现。N17 与N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体,两条Xq+,一条Xp+。生长特性 粘附文献评价 293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5)DNA的永生化细胞。[RF32725]表达
注意的是多数细胞有三条X染色体,两条Xq+,一条Xp+。 生长特性 粘附 文献评价 293细胞 系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5)DNA的永生化细胞。 表达转染的腺病毒5的基因。 早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端[RF32764],现已清楚仅含有左端序列。 此细胞系人腺病毒滴度高。 室温不贴壁,37℃几日后重新贴壁。 表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基













