- ￥1350
- SAIOS（赛奥斯）
- CL-199h
- 2025年09月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Human Glioma Cells
- 库存：
99
- 物种来源：
人
- 细胞形态：
上皮细胞样
- 运输方式：
常温/干冰
- 生长状态：
贴壁生长
- 规格：
1×10⁶cells
一.细胞介绍
该细胞建系于1979年，细胞来源于一个右额顶枕叶胶质母细胞瘤患者。细胞显示p53突变，同时在p16及p14ARF 肿瘤抑制基因可能存在缺失。他们均含有野生型PTEN 基因。
二.细胞特性
（1）来源：胶质母细胞瘤
（2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
（3）含量：>1x10⁶cells
（4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
（5）用途：仅供科研使用。
三.培养基及培养冻存条件准备
（1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，5%；双抗，1%。
（2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
（3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
四.运输和保存
（1）冻存细胞：1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）复苏好的活细胞：T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
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细胞接收后的处理：
（1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
（2）请在4或5x显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
（3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
（4）注意：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。
细胞处理：
（1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
（2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
（3）细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面以T25瓶为例：
（1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
（2）1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
（3）将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存，同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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文献和实验Li H., Hamou M.-F., de Tribolet N., Jaufeerally R., Hofmann M., Diserens A.-C., Van Meir E.G.
Variant CD44 adhesion molecules are expressed in human brain metastases but not in glioblastomas.
Cancer Res. 53:5345-5349(1993)
