- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0205
- 国产
- 2025年12月30日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Clostridium Difficile Probe PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌，一般寄生在人的肠道内。如果过度服用某些抗生素，艰难梭菌的菌群生长速度加快，影响肠道中其他细菌，引发炎症。该细菌会引起伪膜性肠炎，临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，症状突然开始，并伴随血压低，严重时能致死。通常还伴有发烧，白细胞增多，之后可导致死亡，是很严重的一类疾病。该细菌还会引起抗生素相关性腹泻，在体内的潜伏期为5-10天，之后导致大量的棕色或水状腹泻，持续1周左右。除上述疾病外，艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一，日益被人们所重视，因此快速检测艰难梭状芽孢杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测艰难梭状芽孢杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人艰难梭状芽孢杆菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5 mL（本色盖） |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 艰难梭状芽孢杆菌PCR引物 | 100 μL（白盖） |
| 艰难梭状芽孢杆菌qPCR探针 | 100 μL（棕色管） |
| 艰难梭状芽孢杆菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL) |
50 μL（红盖） |
| DNA释放剂试用装 | 50次（试用装） |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂
样品DNA。
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
- 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
成分 样品管
N+2个PCR阴性对照管 标准曲线
样品管（2-7管）2×Probe qPCR MagicMix（本色盖） 10 μL 10 μL 各10 μL 艰难梭状芽孢杆菌 qPCR探针（绿盖） 2 μL 2 μL 各2 μL 艰难梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液（白盖） 2 μL 2 μL 各2 μL 待测样品DNA模板 6 μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） 不加 不加 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）
盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
| PCR反应 （40个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 50℃ | 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ |
|
数据处理
以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推
- 算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果有必要电泳确认，可取10-20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境，建议不轻易采纳。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验人 难辨梭状芽孢杆菌毒素A 型抗原酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中难辨梭状芽孢杆菌毒素A 型抗原含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人难辨梭状芽孢杆菌毒素 A 型抗原水平。用纯化的人难辨梭状芽孢杆菌毒素 A 型抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入难辨梭状芽孢杆菌毒素
人 难辨梭状芽孢杆菌毒素B 型抗原酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中难辨梭状芽孢杆菌毒素B 型抗原含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人难辨梭状芽孢杆菌毒素 B 型抗原水平。用纯化的人难辨梭状芽孢杆菌毒素 B 型抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入难辨梭状芽孢杆菌毒素
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
技术资料