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- YLKBIO
- YLK-PCR0188
- 国产
- 2026年04月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Actinobacillus pleuropneumoniae Detection Kit（Real-Time PCR Method）
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
【产品名称】
通用名称：传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)
Name ：Actinobacillus pleuropneumoniae Detection Kit（Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）引起的一种以急性胸膜肺炎为特征的猪的呼吸道传染病。病理特征是纤维性胸膜肺炎和出血坏死性肺炎。该病多以最急性型发生，并很快引起猪的死亡，慢性型的导致生长缓慢，成为僵猪，降低饲料报酬，造成很大经济损失[1]。荧光PCR技术法因其简便、快捷、灵敏度高、特异性强成为APP检测的主要手段之一[2-3]。
本试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中的传染性胸膜肺炎放线杆菌，用于传染性胸膜肺炎放线杆菌感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采对传染性胸膜肺炎放线杆菌基因保守区设计特异性引物探针，用荧光PCR技术对传染性胸膜肺炎放线杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 酶液 | 50μL×1管 |
| APP反应液 | 500μl×2管 |
| APP阳性质控品 | 50μL×1管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1管 |
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
- 样品处理（样本处理区）
- 样本前处理
- DNA提取
- DNA的提取也可以采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的DNA提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
- 试剂配制（试剂准备区）
| 试剂 | APP反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为N） | 20μL | 1μL |
- 加样（样本处理区）
- PCR扩增（核酸扩增区）
- 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
- 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
- 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
- 结果判断
可疑：检测通道35<Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35<Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
- 质控标准
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
- 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
- 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
- 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
- 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
- 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行；
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
- 反应液应避光保存；
- 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
- 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【参考文献】
[1] 张朝阳, 刘二龙. 猪传染性胸膜肺炎研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2006.
[2] 王海丽, 葛长城, 徐公义, 等. 猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2009.
[3] Gram T, Ahren P, Andreasen M, et al. An Actinobacillus pleuropneumoniae PCR typing system based on the apx and omlA genes- evaluation of isolates from lungs and tonsils of pigs[J]. Vet Microbiol, 2000, 75(1):43-57.
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