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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Hepatitis A Virus(HAV)Probe qRT-PCR Kit
- 保质期:
1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
甲型肝炎病毒探针法荧光定量RT-PCR 试剂盒产品及特点
1973 年Feinslone 首先用免疫电镜技术在急性期患者的粪便中发现甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus, HAV ) 。为小 RNA 病毒科嗜肝病毒属。人类感染 HAV 后,大多表现为亚临床或隐性感染,仅少数人表现为急性甲型肝炎。甲肝发病急,有发烧、饭后恶心、呕吐、乏力、小便色似浓茶、部分病人可伴有黄疸 和肝功能异常等症状,因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测甲型肝炎病毒的试剂盒,它具有下列特点:

规格及成分
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂
样品 RNA。
使用方法
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪
头,下同)。
二、样品 RNA 的制备
1973 年Feinslone 首先用免疫电镜技术在急性期患者的粪便中发现甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus, HAV ) 。为小 RNA 病毒科嗜肝病毒属。人类感染 HAV 后,大多表现为亚临床或隐性感染,仅少数人表现为急性甲型肝炎。甲肝发病急,有发烧、饭后恶心、呕吐、乏力、小便色似浓茶、部分病人可伴有黄疸 和肝功能异常等症状,因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测甲型肝炎病毒的试剂盒,它具有下列特点:
- 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。
- 引物和探针经过优化,灵敏性高。
- 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
- 特异性高,引物是根据甲型肝炎病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的RNA 发生交叉反应。
- 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

规格及成分
| 成分 | 包装 |
| 2×Probe qRT-PCR MagicMix | 500μL(本色盖) |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL(黄盖) |
| 甲型肝炎病毒探针法 qRT-PCR 引 物混合液 |
100 μL(白盖) |
| 甲型肝炎病毒 qRT-PCR 探针 | 50 μL(棕色管) |
| 甲型肝炎病毒探针法 qRT-PCR 阳 性对照(1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
| 核酸释释剂(试用装) | 20 次(1mL,绿盖) |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂
样品 RNA。
使用方法
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪
头,下同)。
- 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
- 如果有 N 个样品,最好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为 NC。
- 用自选方法纯化样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 RNA 提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为RT-
- 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设
成分 |
样品管N+2 个 | RT-PCR 阴性对照 管 |
标准曲线样品管 (2-7 管) |
| 2×Probe qRT-PCR MagicMix | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 甲型肝炎病毒 qRT-PCR 探针 | 各 1 μL | 1 μL | 各 2 μL |
| 甲型肝炎病毒探针法 qRT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 RNA 模板 | 各 7 μL | - | - |
| 超纯水 | - | 7 μL | - |
第 7 步所得标准曲线样品稀释液 (2-7 号) |
- |
- |
各 7 μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号 管…) |
- 盖上盖子后上机,按下面参数进行 RT-PCR:
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 30 min 预变性 95℃ 10 min RT-PCR 反应
(40 个循环)95℃ 15 sec 60℃ 1 min(采集 FAM 通道的荧光
信号)
、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct
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技术资料甲型肝炎病毒探针法荧光定量RT-PCR 试剂盒
¥2800









