- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0143
- 国产
- 2025年08月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
One-Tube Viral RNAOUT
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
常温运输，4℃保存
- 规格：
50T
本产品是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒 RNA 的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床 RT-PCR 检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。
- 适用于血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等液体样品。
- 回收率达到 90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
- 灵敏度高，RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50-100 拷贝/mL(对 HIV 和
- 一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
- 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
规格及成分
| 成 份 | 塑料袋包装 |
| RNA 病毒裂解液 | 30 mL |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂
异丙醇，70%乙醇。
使用方法
- 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。
- 在离心管中分别加入 0.2 mL 液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等），阳性对照和阴性对照。
- 、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入 0.2mL 自备生理盐水中挤压出液体，然后取 0.2mL 进行提取。
- 、 如果是粪便等半固定样品，则取约 0.3mL 的样品，加入 0,3 自备生理盐水，震荡重悬，离心取 0.2mL 上清进行提取。
- 、 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组DNA 污染。血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 时由于所加入 ACD 会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用 EDTA 低 15% 左右。血浆最好按 0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
不可避免的会含有基因组DNA 污染。
1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、用剩下的 0.2mL继续操作。
- 在每个离心管中加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液。RNA 病毒裂解液在低温放置会产生结晶沉淀，需提前 65℃水浴溶解并充分摇匀后取用。
- 室温放置 10 分钟裂解病毒。
- 振荡数秒后加入 0.7 mL 室温异丙醇，旋紧盖后振荡 30 秒混匀，把离心管的向心面对向转头的中央，13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。
- 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时可能看不见）。
- 加入 1.0 mL 室温 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意： 在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
- 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的 RNA 沉淀（此时呈膜状沉淀）。
- 再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体（70%乙醇），否则它会影响后续反应。
- 加入 200 μl RNase-free 水或天泽基因的 1×液相 RNase Erasol(能灭活残留的 RNase, 而 RNase-free 水无此功能)，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁
有 RNA，所以不要离心后取上清使用，必须取混合液使用，哪怕很浑浊。
- 直接取适量用于RT-PCR，如果溶于200 uL 水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的 1/2，不溶物一般不会影响 RT-PCR。剩余样品可以室温放置 2 小时， 也可保存于-80℃保存一个月。
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个 RNA 分子)，同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下)，样品中病毒数往往也不是很多，使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微，十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用电泳和测OD 检测，只能通过 PCR 或 RT-PCR 检测，而病毒 RNA 往往具有稳定的二级结构， 进一步增加了鉴定的难度（即不知道是 RNA 提取的问题还是 RT-PCR 的问题）。Q：如何判断是病毒 RNA 没提取出来还是提取出来了但没有 RT-PCR 成功？
A：在 RT-PCR 反应中加阳性和阴性对照。
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文献和实验慢病毒（Lentiviral，LV）可将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久性表达，这一特性使其在科研与临床治疗（CART）中大放异彩。 但在临床治疗中，外源基因的整合会带来插入突变的风险。这种情形下，研究者开始拓展非整合慢病毒的可能性。 IDLV(Integration-deficient Lentiviral) 即整合缺陷型慢病毒，是通过在慢病毒整合酶中引入突变产生的非整合型慢病毒，「不整合」的特性使其更适合于静息细胞、临床治疗、干细胞研究等场景使用。 与其他载体相比，其优势
血液从心脏流出后，在体内总是在各级血管中，并按一定的方向向前流动，最后又返回心脏。这样周而复始，反复在心脏、血管中循环流动，并借毛细血管在动脉和静脉之间连络。这样的循环方式，称为闭管式循环。如无脊椎动物环毛蚓，在第 7、 9、 12、 13节内有 4对能搏动的心脏（粗大的环血管），主要大的血管有背血管、腹血管、神经下血管和联系各血管的细环血管，血液在其中反复循环。所有的脊椎动物都属闭管式血液循环，但鱼纲为单循环，两栖纲以上的动物均为双循环（体循环和肺循环）。
血液不是完全在心脏和血管中流动的循环。由于动脉和静脉之间无直接联系，血液也不完全封闭在血管中。血液由心脏经血管流入假体腔或体腔中，浸润着全身各组织器官，并进行物质交换，有的可被静脉引去（如螺、蚌等软体动物），有的则由心门流回心室（如蝗虫等节肢动物）。这样的血液循环方式，称为开管式循环。
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