- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0112
- 国产
- 2025年08月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Seneca Valley virus(SVV) SYBR qRT-PCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus，SVV)是一种RNA病毒，猪感染塞尼卡谷病毒引起的病变与口蹄疫感染类似，但该病对猪并没有致命性，对人的健康也无影响。已在巴西、美国等国发生，仔猪感染可导致死亡，因此快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点：
- 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
- 根据塞尼卡谷病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
- 基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
- 使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
- 本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
| 成 份 | 包装 |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（棕色管） |
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL（红盖） |
| ROX染料I | 50 μL（棕色管） |
| ROX染料II | 50 μL（棕色管） |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（亮黄盖） |
| 塞尼卡谷病毒RT-PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 塞尼卡谷病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL） |
50 μL（黄盖） |
| 核酸释放剂 | 1mL（绿盖） |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供RNA片段作为阳性对照。
自备试剂
样品RNA
使用方法
一、稀释阳性对照（以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45 μL 荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
| 成分 | N+2个制备所得样品 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性 对照（2-7管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 口蹄疫病毒RT-PCR 引物混合物 |
2μL | 2μL | 各2μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
| 样品制备所得RNA模板（来于第8步） | 5.6μL | 不加 | 不加 |
| 稀释所得6个阳性对照（来于第6步） | 不加 | 不加 | 各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 |
2μL | 2μL | 2μL |
需使用ROX染料II的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System， LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| RT（逆转录） | 50℃ | 15-30分钟 |
| 预变性 | 94℃ | 2分钟 |
| RT - PCR反应 （30个循环） |
95℃ | 15 秒 |
| 60℃ | 15 秒（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 15 秒 | |
| 按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确
或者 Ct 值偏大的样本孔，到底是真的没有要检测的对象，还是扩增有问题，亦或是提取中的问题？为了发现这种假阴性的发生，合理的阳性对照可以监控实验的不同步骤： 扩增对照 Amplification Control 可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组 DNA/cDNA 作为扩增阳性对照，监控荧光定量 PCR 的体系是否正常，包括酶、引物、探针等。如果检测中包含多个目标片段，可以将这些目标片段都克隆到同一个质粒中，方便制备和使用。当扩增对照没有扩增，或者 Ct 值大于预期，则说明定量 PCR
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