- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0095
- 国产
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Human Leukocyte Antigen-A(HLA-A)SYBR qPCR Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）是人类的主要组织相容性复合体（MHC）的表达产物，该系统是目前所知人体最复杂的多态系统。 根据基因产物的结构，功能，细胞分布等因素，将 HLA 基因分成了 3 大类，其中 HLA-I 型基因，包括了 HLA-A，HLA-B，HLA-C 等经典的抗原基因。本产品就是以荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测 HLA-A 基因的试剂盒，它具有下列特点：
- 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
- 特异性高，引物是根据 HLA-A 基因高度保守区设计,不会扩增其他基因。
- 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
- 提供无传染性的 PCR 阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式操作，荧光 PCR 检测，不容易产生环境污染。
- 本产品只能用于科研，本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。
规格及成分
| 成分 | 包装 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| HLA-A 基因染料法 qPCR 引物 混合液 | 100 μL（白盖） |
| HLA-A 基因染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL（黄盖） |
| 核酸释放剂试用装 | 1mL（绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂
样品 DNA。
使用方法
一、制备标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（其浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提
4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用
| 成分 | N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 对照管 |
标准曲线 样品管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| HLA-A 基因染料法 qPCR 引物 混合液 |
2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 个待测样品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 自备超纯水 | 不加 | 6 μL | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） |
不加 |
不加 |
各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3号管…） |
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480） 不需要使用 ROX，则用水替代。
四、荧光定量 PCR 反应参数
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预热 | 50℃ | 2 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集 SYBR 通道的荧 光信号） |
|
| 按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
五 数据处理
- 设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct
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