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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Hepatopancreatic Parvovirus(HPV) SYBR qPCR Kit
- 保质期:
2年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
肝胰腺细小病毒(Hepatopancreatic Parvovirus,HPV)与对虾肠道内微生物群落有很大关系,在微生物群落稳定且有益微生物较多时,能维持对虾免疫力水平,从而抑制病毒的感染。反之,微生物群落不稳定而遭到破坏时,就极易引起对虾感染。该病通常是由水质指标(氨氮,亚盐等)恶化或偏高;天气变化、突然换料、饲料质量差、纤毛虫病等引起的。该病的常见症状是病虾反应迟钝,空胃,不吃食,弹跳无力,漫游池边或水面,头胸甲上有明显的针眼大小不规则的白色斑点,显微镜检查一般为花骨朵状的,肝胰脏肿大糜烂或发红或体表发红,几天内就会有大量死亡,对海产养殖业造成严重损害,因此肝胰腺细小病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了简单快捷的肝胰腺细小病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒,它具有下列特点:
- 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
- 根据肝胰腺细小病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
- 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
- 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
规格及成分
| 成分 | 十孔盒包装 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL(棕色管) |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL(黄盖) |
| 肝胰腺细小病毒PCR引物混合物 | 100μL(白盖) |
| 肝胰腺细小病毒PCR阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50μL(红盖) |
| DNA病毒裂解液(试用装) | 15次(9 mL) |
| 使用手册 | 1份 |
运输及保存
低温运输、-20℃保存,有效期一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
使用方法
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
- 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
- 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头,下同)。
- 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
- 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
- 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送15次一管式病毒DNAout
10.如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
| 成分 | 样品管 N+2个 |
PCR阴性对照管 | PCR阳性 对照管(2-7管) |
| 2×qPCR MagicMix (棕色管) |
10 μL | 10 μL | 各10 μL |
| 肝胰腺细小病毒PCR 引物混合液(白盖) |
2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 自备10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| N+2待测样品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得PCR阳性对照 稀释液(2-7号) |
不加 | 不加 | 各6μL(2号样到2号管,3号样到3号管…) |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 92℃ | 5分钟 |
| PCR反应 (30个循环) |
92℃ | 60 秒 |
| 54℃ | 60 秒 | |
| 75℃ | 60 秒 |
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文献和实验等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA或差显结果的确证。 基因分型。例如SNP检测,甲基化检测等。 实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用: 病原体检测: 目前,采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、肝炎病毒、结核杆菌、细小病毒B19、EB病毒和人巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。 遗传及优生优育诊断
,不靠壁,不贴液面。 混匀平均分装的注意事项: 1、第一管吸液前需要先把枪头在液面中浸润一下,以保证三复孔的枪头吸液量是差不多的。 2、用混匀器进行混匀,不要用移液器吹打。 详细说明书 transhold cat. A2010A0112荧光定量PCR Premix试剂盒(荧光染料) (FQ
所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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