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- YLKBIO
- YLK-PCR0028
- 国产
- 2026年01月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
ASFC qPCR Kit（Dye based）
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
非洲猪瘟病毒荧光定量PCR 试剂盒
ASFC qPCR Kit（Dye based）
产品及特点：
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达 100%， ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此 ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 染料法荧光定量 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分：
| 成分 | 十孔盒包装（去纸托） |
| 2×qPCR MagicMix | 500 μL（装 A 袋） |
| 微量核酸稀释液 （荧光 PCR 专用） |
1 mL（装 A 袋） |
| 非洲猪瘟病毒 PCR 引物混合物 | 100 μL（装 A 袋） |
| 非洲猪瘟病毒基因阳性对照 (1×10E8 copy/μL) |
50 μL（装 B 袋） |
| DNA 病毒裂解液试用装 | 15 次（9 mL） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：
低温运输、-20℃保存(A 袋试剂放样品准备区、B 袋的阳性对照最好分开放置)，有效期 一年。
自备试剂：
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
- 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）。
- 稀释阳性对照
- 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得 1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
三、设置 qPCR 反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后最后加）：
| 成分 | 样品 | 阴性对照 | 阳性对照（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 阳性对照（2-7 号） | 不加 | 不加 | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。
10. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 分钟 |
| PCR 反应 （30 个循环） | 94℃ | 60 秒 |
| 50℃ | 60 秒 | |
| 72℃ | 60 秒 |
- 数据采集
三、数据处理
12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
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