人皮肤成纤维细胞

人皮肤成纤维细胞

产品编号：PC-202h

产品规格：>5×10⁵cells

包装规格：1mL冻存细胞悬液或T-25培养瓶

一．细胞描述

皮肤指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。

成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

二．细胞特性

1) 细胞来源于手术切除的正常包皮组织；

2) 细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性；

3) 经鉴定细胞纯度高于90%；

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌；

5) 细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

三．培养建议

人原代皮肤成纤维细胞的体外培养周期有限，建议使用本公司原代细胞专用培养基和正确的培养方法来培养，以此保证细胞具备良好的增殖和分化能力。推荐使用：成纤维细胞培养基（货号：PM-003）。

四．细胞运输和保存

1) T25瓶形式：培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

2) 冻存管形式：1mL冻存细胞悬液装于1.8mL的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输。收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

五．产品用途

本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途。

 

细胞传代（建议使用Ｔ-25培养瓶1:2传代）

1) 当细胞汇合度达到85%以上时，可进行传代。

2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；

3) 向培养瓶内加入3mL无菌的1X PBS 后，水平放置培养瓶，使PBS能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃PBS；

4) 向瓶内加入消化液1mL，浸润底面后放入37℃，CO₂培养箱中孵育1~2min；

5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2mL含10%FBS的完全培养基，将悬液吸入15mL离心管；

注：如还有部分细胞未消化下来，可采用分步消化：

① 准备一个无菌的15mL离心管，加入2mL含10%FBS的完全培养基；

② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）；

③ 向之前消化的培养瓶中加入1mL胰酶继续消化2min左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入2mL含10%FBS的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。

6) 1000rpm离心5min；

7) 准备两个新的T-25培养瓶，各加入4mL完全培养基。

8) 离心完成后，弃上清，用2mL完全培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入2个T-25培养瓶，每个培养瓶各1mL；

9) 水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于37℃，5% CO₂培养箱中静置培养。