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- 华纳生物
- WN-12960
- 武汉
- 2025年07月11日
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pEGFP-N3
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武汉华尔纳生物科技有限公司
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Product Introduction
| 品牌 |
华纳生物 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 货号 |
WN-12960 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 规格 |
2ug | ||||||||||||||||||||||||||||
| 价格 |
询价 | ||||||||||||||||||||||||||||
| 货期 |
现货 | ||||||||||||||||||||||||||||
订购信息
质粒图谱 载体描述pEGFP-N3 encodes a red-shifted variant of wild-type GFP (1–3) which has been optimized for brighter fluorescence and higher expression in mammalian cells. (Excitation maximum = 488 nm; emission maximum = 507 nm.) pEGFP-N3 encodes the GFPmut1 variant (4) which contains the double-amino-acid substitution of Phe-64 to Leu and Ser-65 to Thr. The coding sequence of the EGFP gene contains more than 190 silent base changes which correspond to human codon-usage preferences (5). Sequences flanking EGFP have been converted to a Kozak consensus translation initiation site (6) to further increase the translation efficiency in eukaryotic cells. The MCS in pEGFP-N3 is between the immediate early promoter of CMV (PCMV IE) and the EGFP coding sequences. Genes cloned into the MCS will be expressed as fusions to the N terminus of EGFP if they are in the same reading frame as EGFP and there are no intervening stop codons. SV40 polyadenylation signals downstream of the EGFP gene direct proper processing of the 3' end of the EGFP mRNA. The vector backbone also contains an SV40 origin for replication in mammalian cells expressing the SV40 T-antigen. A neomycin resistance cassette (Neor), consisting of the SV40 early promoter, the neomycin/kanamycin resistance gene of Tn5, and polyadenylation signals from the Herpes simplex virus thymidine kinase (HSV TK) gene, allows stably transfected eukaryotic cells to be selected using G418. A bacterial promoter upstream of this cassette expresses kanamycin resistance in E. coli. The pEGFP-N3 backbone also provides a pUC origin of replication for propagation in E. coli and an f1 origin for single-stranded DNA production. 载体应用Fusions to the N terminus of EGFP retain the fluorescent properties of the native protein allowing the localization of the fusion protein in vivo . The target gene should be cloned into pEGFP-N3 so that it is in frame with the EGFP coding sequences, with no intervening in-frame stop codons. The inserted gene should include the initiating ATG codon. The recombinant EGFP vector can be transfected into mammalian cells using any standard transfection method. If required, stable transformants can be selected using G418 (7). pEGFP-N3 can also be used simply to express EGFP in a cell line of interest (e.g., as a transfection marker). |
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文献和实验maoliping70：pEGFP-N1为载体表达的核蛋白要确证表达于核内的方法为用PI染色，PI只与核酸结合，在488nm激发下发红光，而GFP发绿光，红光与绿光重叠发黄光。还有以下疑问：1.作为对照的pEGFP-N1空载体转染细胞后表达的GFP蛋白为27KD，能自由通过核孔复合体，也就是说GFP在核内也有表达，那会与PI重叠发黄光影响测定吗？2.有提出GFP在细胞固定时，会从细胞漏出，那细胞本身表达的浆蛋白若分子量小，也会漏出吗？还是因为有定位信号而不漏出？3.细胞固定用的70%乙醇是直接
alterego 查阅了很多文献，结果把自己越搞越糊涂了 因为是做阳离子的复合载体，主要是用PEI进行siRNA的静电吸附，PEI经过修饰之后，氨基有所变化，已经通过化学的比色法进行残余氨基测定，可以确定氨基残基（N）的mol数 但是每个mol的21nt的双链siRNA（19对RNA，2*2个嵌合DNA，很经典的搭配）中磷酸集团（P）应该算成几个mol呢？查阅了许多类似的siRNA文献，都没有正面说这个问题。DNA的东西貌似
ono1180 求助各位同道： 我想过表达一个基因，想选用一个质粒载体连接此基因再转染入细胞，选用的载体需要有绿色荧光标记，而且能筛选出稳定转染的细胞系，上网查了一下觉得pEGFP系列的好像符合我的要求。 请问这个载体怎么样，大家还有什么载体觉得挺好，请指教，感谢了。 xiaokangkuaile 我用的是pEGFP-C1表达载体，但我的目的基因对GFP表达有影响，转染效果很差
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