体液外泌体抽提试剂盒Plus(外泌体提取分离)

产品描述：

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从体液如脑脊液、羊水、唾液、肺泡灌洗液及鼻腔盥洗液等体液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

组分信息

* Nuclease-free, Sterile

产品特色：

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应用案例：

使用说明

1. 样本预处理

1) 取样：收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用；

2) 样品初始用量：单次提取时的样品量建议肺泡灌洗液、腹水等不低于1 mL，建议1次提取2~3 mL体积；

3) 离心去细胞碎片：将样品转移至离心管中，于4℃以3,000×g离心10 min，去除样品中的细胞碎片(若沉淀较多，可3,000×g, 10 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；

4) 离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以12,000×g离心10 min, 去除样品中的杂质碎片；

5) 上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。

2. 外泌体提取

1) 上清液预处理：在去除杂质的离心上清液中加入41208-A试剂，具体的加入量如下(其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换):

2) 溶液混合：加入41208-A试剂后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1min，再放置4℃静置8h以上(注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24h)；

3) 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以12,000×g离心30 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒(注：尽可能吸尽上清液)；

4) 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于4℃以12,000×g离心2 min，弃上清(注：尽可能吸尽上清液)；

5) 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中(建议每1 mL体液用100 μL左右1×PBS重悬)；

6) 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12,000×g离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒(若沉淀较多，可12,000×g, 2 min离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液)；

3. 外泌体纯化

1) 纯化外泌体：将收获的同一体液来源的外泌体颗粒粗品转入41208-B(EPF柱)上室中，于4℃以3,000×g离心10 min，离心后收集EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒(注：EPF柱不可重复使用)；

2) 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

注意事项

1) 使用前请将外泌体抽提试剂（41208-A）充分混匀。

2) 如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

3) 产品只针对体液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5) 本产品仅作科研用途！

储存条件：

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。