- ￥1896
- 博尔森生物
- BES2115PCR
- 中国/上海
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
999
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
48T
霍乱弧菌O139型核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
产品说明致病菌检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于霍乱弧菌 O139 型的检测。检出限为 10³ CFU/ml。
产品组成（48 测试）
适用仪器
Dhelix 1610、Dhelix 3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒温荧光检测仪，ABI 7500，LightCycler480，CFX 96 等荧光 PCR 仪。
自备耗材和仪器
①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，
100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴
注意事项
1. 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1） 第一区：试剂准备区。
2） 第二区：样本制备区。
3） 第三区：扩增及产物分析区。
分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3. 严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5. 反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6. 不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
7. 检出限为 10³ CFU/ml是以 1 ml 10³ CFU/ml增菌液离心后收集菌体再提取的细菌基因组 DNA作为模板。
样品处理
参照 《SN/T 1022-2010 进出口食品中霍乱弧菌检验方法》中的 7.1 和 7.2 处理样品，对样品进行前增菌，制备
的菌液保存待用。以无菌操作取检样 25 g，放入装有 225ml 灭菌 APW 增菌液的均质杯内，于 8000 rpm/min～
10000rpm/min 均质1 min～2 min，或以剪刀充分剪碎，制成 1:10 样本匀液。深冻样品、干品、盐渍产品的初始增菌液放置在 37℃ ± 1℃培养6 h ± 1 h，新鲜样品的初始增菌液放置在 41.5 ℃ ± 1 ℃培养 6 h ± 1 h。如果样品不够25g，则取全部样品，加入 9xml 增菌液以获得 10-1 浓度的样品匀液。若上述制备的待检样品不能在当日进行培养，应放置在 2℃~8℃保存至次日。为提高检出率，可进行第二次增菌，取 1 ml 培养物接种到 10 ml 的 APW 中，置于41.5 ℃ ± 1 ℃培养 18 h± 1 h（加入样品前，APW 应预先保温至 37℃±1℃）。详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
实验操作
将试剂完全解冻，各组分离心30s。
1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：
若有N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对），将反应液置于0.6ml 或者1.5ml 离心管中，涡旋混匀，离心30 秒，分装于0.2ml PCR 管中，并向每管加入1滴C-I（约 20μl）。
2. 模板制备（样本制备区）
建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品，具体过程详见产品说明书。
3. 添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）
向步骤 1 中已含有混合液的 PCR 管中分别加入 2μl 模板，顺序为待测样品模板、阳性对照 PG-O139-I（阴性对照管无需额外加入模板），离心 30 秒，立即进行扩增反应。
4. 扩增反应（扩增及产物分析区）
①恒温仪器 63℃条件下反应 45min。
②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，45 个循环。
其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
结果判定
①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有霍乱弧菌 O139 型；若显示“阴性”，则样品中不含
有霍乱弧菌O139 型或含量低于检测限。
②在荧光定量 PCR 仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有霍乱弧菌 O139型；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有霍乱弧菌 O139 型或含量低于检测限。
NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。
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霍乱弧菌O139型核酸检测试剂盒（恒温荧光法）
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