Annexin V-EGFP/PI凋亡检测试剂盒
Annexin V-EGFP / PI Apoptosis Detection Kit
本产品冰袋运输;避光保存于4℃,保质期12个月。
货号规格
goodCX005SL 120次
goodCX005SL 150次
goodCX005LS 100次
产品简介
good细胞凋亡(Apoptosis)是最常见的细胞死亡方式之一,其受到基因的严格调控。细胞凋亡过程常伴随着明显的细胞形态学变化,比如,细胞凋亡早期,质膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)会翻转到细胞质膜表面;而在凋亡的中后期,随着细胞质膜的通透性的增大,一些较大分子的化合物,如碘化丙啶(Propidium Iodide,PI,一种DNA结合染料),便可自由扩散进入细胞,将细胞核染上红色荧光。
goodAnnexin V( 膜联蛋白 -V) 是一种分子量为 35~36 kDa 的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与磷脂酰丝氨酸高亲和力特异性结合。本试剂盒采用与绿色荧光蛋白 (EGFP) 融合的 Annexin V 作为检测磷脂酰丝氨酸的探针,配合碘化丙啶 (PI),通过使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备,可以快速检测细胞凋亡。Annexin V-EGFP 凋亡检测试剂盒对细胞群进行染色后,早期凋亡细胞显示绿色荧光,晚期凋亡细胞及坏死细胞显示红色和绿色荧光,活细胞几乎没有荧光。
产品内容
组分 |
CX005S |
CX005 |
CX005L |
Annexin V-EGFP |
100 µL |
250 µL |
500 µL |
碘化丙啶(PI) |
200 µL |
500 µL |
1 mL |
结合缓冲液(10×) |
10 mL |
25 mL |
50 mL |
注意事项
good1. 如进行流式检测,建议使用 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒 (货号:CX006) ,实验结果会更理想,如使用本产品进行流式检测,需按以下操作:
good1. 流式检测需设置三个对照样品来校准:
good1. 空白管:仅用 结合缓冲液 重悬的细胞,以评估自身荧光水平,并相应地调整仪器;
good1. 单染管:分别用 Annexin V-EGFP或碘化丙啶(PI)染色,以确定每个细胞群体的边界;
good1. 流式细胞仪检测时,使用 FITC 通道(通常是FL1)检测 Annexin V-EGFP;phycoerythrin通道(通常是FL2)检测PI。用 CellQuest 等软件进行分析,以 EGFP 为横坐标,PI 为纵坐标,绘制双色散点图(two-color dot plot);
good2. 如使用含EDTA的胰酶消化细胞时,有必要在染色之前用PBS或 结合缓冲液 洗涤细胞两次以去除EDTA,从而避免螯合Annexin V所必需的Ca2+;
good3. 建议细胞在染色后1 h之内完成检测;
good4. 实验操作过程需尽量轻柔,从而最大限度地保留凋亡的细胞;
good5. 试剂在开盖前请短暂离心,将管盖及内壁上的液体甩至管底,以避免开盖时液体洒落;
good6. Annexin V-EGFP和PI是光敏物质,在操作时请注意避光;
good7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
good8. 本产品仅限科研使用。
操作步骤
good◆ 对于悬浮细胞
good1. 用无菌去离子水将 结合缓冲液 (10×) 稀释成 1× 结合缓冲液;
good2. 离心收集细胞 (500~1,000 × g,5 min);
good3. 加入预冷的 PBS(pH 7.4) 轻轻重悬细胞,用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次;
good4. 用 1× 结合缓冲液重悬细胞,使细胞浓度达到 1×106 cells/mL;
good5. 吸取 100 μL 细胞悬液 ( 细胞总数为 1×105 cells) 至一新 EP 管中,加入 5 μL Annexin V-EGFP 和5~10 μL 碘化丙啶 (PI),轻轻混匀,室温避光孵育 10~15 min;
good6. 染色孵育后,每管加入 800 μL 1× 结合缓冲液,轻轻混匀,离心 (500 × g,5 min),去上清;
good7. 向管中加入 100 μL 或合适上样体积的 1× 结合缓冲液,轻轻重悬细胞,即可涂片后在荧光显微镜下进行观察,或立即进行流式细胞仪检测。
good◆ 对于贴壁细胞
good1. 用无菌去离子水将 结合缓冲液 (10×) 稀释成 1× 结合缓冲液;
good2. 首先将细胞培养液吸出至一新离心管内,接着用预冷的 PBS(pH 7.4) 轻柔地洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液 ( 不含 EDTA ),室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞脱落下来即可,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化,以免造成假阳性;
good3. 在细胞中加入上一步骤收集的细胞培养液,稍混匀,转移至离心管内,离心 (500~1,000 × g,5 min),弃上清,收集细胞;
good◆gg注意 : 加入步骤 1 中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-EGFP 导致染色失败。
good4. 加入预冷的 PBS(pH 7.4) 轻轻重悬细胞,用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次;
good5. 用 1× 结合缓冲液重悬细胞,使细胞浓度达到 1×106 cells/mL;
good6. 吸取 100 μL 细胞悬液 ( 细胞总数为 1×105 cells) 至一新 EP 管中,加入 5 μL Annexin V-EGFP 和5~10 μL 碘化丙啶 (PI),轻轻混匀,室温避光孵育 10~15 min;
good7. 染色孵育后,每管加入 800 μL 1× 结合缓冲液,轻轻混匀,离心 (500 × g,5 min),去上清;
good8. 向管中加入 100 μL 或合适上样体积的 1× 结合缓冲液,轻轻重悬细胞,即可涂片后在荧光显微镜下进行观察,或立即进行流式细胞仪检测。