Luminex多功能液相芯片蛋白分析平台

Merck&Millipore
机器型号	MAGPIX®	Luminex 100®/200®	FLEXMAP®3D®
软件	xPONENT®4.2	xPONENT 3.1	xPONENT 4.2
光学原件	LED/CCD Camera	Lasers/APDs/PMTs	Lasers/APDs/PMTs
硬件	Fluorescent Imager	Flow Cytometry based	Flow Cytometry based
微球类型	Magnetic	Magnetic and non-Magnetic	Magnetic and non-Magnetic
检测参数	50	100 (80 for MagPlex)	500
读时	~60 mins/96 well plate	~40 mins/96 well plate	~20 mins/96 well plate
应用	Protein/Nucleic Acid	Protein/Nucleic Acid	Protein/Nucleic Acid
线性范围	3.5 logs	3.5 logs	4.5 logs
上样空	96 well	96 well	96 well & 384 well

液相芯片发展历史
流式细胞技术主要研究对象为细胞：大小，密度，细胞胞内保外蛋白表达类型，细胞周期，凋亡，增值等；而对于体液，血清，细胞培养上清流式应用非常局限（CBA技术）。流式发展20年，具有深远意义的突破是将生物芯片技术原理同流式细胞仪检测方法结合起来，即以Luminex公司为代表的液相芯片技术（Liquid chip）。
第一台流式细胞仪
1972 年Len Herzenberg 、Bill Bonnar、Dick Sweet 和Russ Hulett 等在斯坦福大学研制出一台荧光激活细胞分选仪(fluorescenceactivated cell sorter, FAGS 它标志着流式细胞仪商品化时代的到来。该机以氢离子激光为光源，可以检测细胞所发出的非常微弱的荧光。
1974 年Bection Dickinson公司(BD 公司)将它投入市场，商品名为FACS -1。
第一块生物芯片历史

• Affymetrix公司利用照相平板印刷、计算机、半导体、激光共聚焦扫描、寡核昔酸原位光刻合成、荧光标记探针杂交等技术创造了世界上第一块DNA 芯片，他们将64000 个不同的寡核昔酸片段微缩到一块仅1. 28cm X 1. 28cm 的片基上。

液相芯片历史
1999 年 推出第1代Luminex 100 液相芯片检测系统，1 个样本中的100 种不同目的分子进行检测。
2005 年 推出了Luminex 200 液相芯片检测系统，是美国FDA 批准用于临床诊断的液相芯片检测系统。
2007 年 推出了新一代液相芯片检测平台Flexmap 3D。
2010年 全新设计原理的MagPix系统，即磁珠专用系统。

技术原理

1. 编码微球：分别用不同配比的两种荧光染料将直径5.6um聚苯乙烯微球或者6.5um的磁球染成不同荧光色，从而获得多达100种经荧光编码的微球。
2. 交联探针，抗体或者抗原：把针对不同检测物的核酸探针，抗体或者抗原以共价方式结合到特定荧光编码的微球上。
3. 检测反应：先把针对不同检测物的，不同荧光色编码的微球混合，再加入被检测物。悬液中的微球与被检测物特异性结合，结合物被标记上荧光物质。
4. 激光分析：微球成单列通过两束激光，一束判定微球编码（红光），一束测定微球上的报告分子荧光强度（绿光）。

液相芯片技术优势

• 高通量：同时对同一样本多个指标进行检测，节省样本、试剂、时间和精力；高通量样品处理和高通量96/384空板同时上样检测。
• 操作简单，减少实验误差，具有更好的稳定性（激光，荧光技术；液相环境更好实现检测物化学稳定性）、更好的重复性与批间差（100个微球的平均实验结果）。
• 灵活性好：开放实现平台，同一机器可以用于免疫分析，核酸检测，酶学分析，受体配体识别等多种研究工作。不同检测指标可以自由组合，满足不同科研和临床需求。
• 灵敏度高（下表）：液相芯片最低检测浓度可达到1pg/ml，线性范围宽，可达4个数量级；与ELISA和质谱分析具有很强的一致性。
• 样本用量少：小于50ul样本可分析多达500个指标。
• 成本低：随着检测指标的增多，成本越低，单次单个指标计算，成本明显低于其他检测方法。

液相芯片与其他检测方法灵敏度和线性范围比较

方法	灵敏度（mol/well）	线性范围
ITA	10-5～10-6
ELISA	10-8～10-9
RIA	10-10～10-12
CLIA	10-15～10-16
TRFIA	10-18～10-19
流式CBA技术	10-28
Luminex 100/200	10-30
Flexmap 3D	10-31～10-32

xMAP技术与ELISA免疫检测的比较：
对于传统的ELISA，人们发现每次只能检测一种指标，而xMAP技术的出现，使得在同一份样本中检测指标数高达500个，为科学家们提供了一个快速、灵活、高通量的检测平台。
以80份检测样本中的10个蛋白指标进行同时检测，比较如下：

Millipore长期致力于蛋白质研究领域的研究和发展，从细胞外到细胞内建立了高品质的蛋白质研究平台，开创了蛋白质研究的全新时代，也是全球首家可以提供最新FLEXMAP 3D^TM分析平台的公司。Milliplex的多功能液相芯片平台基于xMAP技术，造就了Milliplex液相芯片系统无与伦比的检测特异性和灵敏度。

Milliplex液相芯片重要组成部件包括：
ü xMAP微球
通过两种或三种荧光染料得到的，调节其之间的荧光比例可以获得100或500种不同颜色的微球（5.6um聚丙烯微球或6.5um磁球），每种颜色的微球可以携带一种生物探针。
ü xMAP技术分析仪器
基于流式技术的检测仪整合了激光系统、光镜系统、精准的鞘液系统以及高速电子处理系统。
ü xPONENT软件
充分发挥Milliplex平台高通量性能的软件，其功能涵盖了仪器控制、数据获取、结果分析等。
ü Milliplex试剂盒
提供包括xMAP微球、抗体、标准品和质控品等实验所需的所有试剂。确保稳定与可重复的实验体系。

Millipore Milliplex检测试剂的优势：
1、 抗体高度特异，保证分析结果的精确和稳定
2、 样本用量少，许多分析项目仅需样本25ul或更少
3、 同时提供阳性对照
4、 操作方便
5、 您可以选择预先装备的试剂盒简化实验操作，也可以自行选择感兴趣的检测项目，实验设计灵活方便
6、 提供针对不同物种来源标本进行分析的试剂，包括人、小鼠、大鼠、犬、灵长类动物
7、分析项目广泛、全面、主要涉及：