- ￥800
- YLKBIO
- 酶联免疫法
- 国产
- YLK-E0459
- 2025年09月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
200
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 检测范围：
酶联免疫法
- 检测方法：
科研
- 应用：
详询
- 适应物种：
人
- 标记物：
hrp辣根过氧化物酶
- 样本：
血清、血浆、组织液等液体样本
- 规格：
48T
96T
本试剂盒仅供研究使用。
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)含量。
相关图片（一）：
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)水平。用纯化的小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)，再与HRP标记的小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（800ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
| 5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
相关图片（二）：
操作步骤
- 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 400ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 200ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 100ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 50ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 25ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
- 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
- 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
- 温育：操作同3。
- 洗涤：操作同5。
- 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
- 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
- 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
相关图片（三）：
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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文献和实验性AFP增高。 检测方法： ELISA、RIA、荧光偏振免疫测定、免疫发光技术、自动化免疫分析等。 参考值： 正常值400μg/L时，对原发性肝细胞癌有较大的诊断价值。
一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中
者，更应高度警惕。肝癌患者血清AFP含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性，分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于200μg/L. 检测AFP的免疫学方法主要有免疫扩散电泳（火箭电泳）、γ-射线计数125I标记检测法和定性、定量酶免疫方法。用不同的植物凝集素可以检测和鉴别不同组织来源的AFP的异质体。如用小扁豆凝集素（LCA）亲和交叉免疫电泳自显影法，可以检测LCA结合型AFP异质体。 血清AFP含量的检测对其它肿瘤的监测亦有重要临床价值。如睾丸癌、畸胎瘤、胃癌、胰腺
