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- AAT Bioquest
- 17284
- 2025年11月06日
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- 技术资料
简要概述
产品基本信息
货号：17284
产品名称：TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*
规格：1ml
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
溶剂：水
产品介绍
用于 TaqMan 探针的 TAQuest qPCR Master Mix 是一种即用型 2X溶液，针对 qPCR 和与 TaqMan 基因表达分析兼容的两步法 RT-qPCR 进行了优化。预混液在优化的 PCR 缓冲液中提供了所有基本成分，包括我们专有的 TAQuest 热启动 Taq DNA 聚合酶和 dNTP，但模板、引物和探针除外。热启动 Taq DNA 聚合酶允许您在室温下设置 PCR 反应，从而最大限度地减少非特异性产物的形成。优化的成分可确保 PCR 对所有样本类型（如基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板）的特异性和灵敏度。用于 TaqMan 探针的 TAQuest qPCR Master Mix 设计用于使用内部阳性对照的双链反应。该预混液含少量 ROX 参考染料。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*。
适用仪器
| qPCR | |
| 仪器规格 | 基于探针的滤波片 |
样品实验方案
注意 在室温下解冻TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX*。 使用前彻底涡旋 qPCR Master Mix。
1. 制备表 1 所示的下列反应混合物之一。
2. 轻轻涡旋混合试剂，然后短暂离心。
3. 在 qPCR 仪器中设置板并按表 2 所示操作。
表 1. 各反应每孔试剂组成
| 成分 | 体积 (25 µL/reaction) | 体积 (50 µL/reaction) | 最终浓度 |
| TAQuest qPCR Master Mix 用于TaqMan探针*低ROX* | 12.5 µL | 25 µL | 1X |
| 上游引物，10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.5-5.0 µL | 0.1-1.0 µM |
| 下游引物，10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.5-5.0 µL | 0.1-1.0 µM |
| DNA模板 | 1-5 µL | 1-5 µL | 优化的浓度 |
| 无核酸酶水 | 25 µL | 50 µL |
表 2. 热循环参数
| 范围 | 聚合酶激活 | PCR (30-40个循环) | ||
| Hold | 变性 | 退火 | 延伸 | |
| 温度 | 95 °C | 95 °C | 55-65 °C | 68-72 °C |
| 时间 (m:ss) | 0:20 | 0:30 | 1:00 | 1:00 |
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文献和实验成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
充分的准备是实验成功的关键，那么，qPCR 实验需要提前做好哪些了解呢？ 试剂的储存条件 市面上大多数 qPCR 试剂推荐 - 20 ℃ 避光长期储存。 Vazyme 的 ChamQTM 和 AceQ® 两个系列的 qPCR Master Mix，长期储存应置于 - 20 ℃ 避光，解冻后可于 4 ℃ 短暂存放；避免反复冻融。 原始模版稀释倍数 尽量选择 Ct 值落在 15 - 28 范围的稀释倍数作为原始模板稀释度。 反应体系与次数 推荐 20 μl 体系，Vazyme
，切除标签，并通过质谱仪检测。如果你们实验室没有质谱仪，而又想开展多重分析，那么下面的一些方案可能适合你。 罗氏应用科学部的Light Cycler 480 Probes Master Mix能成功支持4重反应，甚至达到5重。这是一种即用型的反应预混液，包含了FastStart Taq 热启动型DNA聚合酶，它能减少非特异产物的形成，从而显著改善PCR的特异性和灵敏度。 Bio-Rad的iQ Multiplex Powermix能检测最多4个目标，即使它们的表达量相差106倍
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