- ￥1250 - 1750
- 威奥生物
- 详情见说明书
- 上海市闵行区
- EH6375M
- 2026年01月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1盒
- 供应商：
威奥生物
- 检测范围：
详情见说明书
- 检测方法：
夹心法
- 应用：
科研
- 适应物种：
人
- 标记物：
详情见说明书
- 样本：
血清/ 血浆/ 细胞培养上清/组织匀浆/其它生物体液
- 规格：
48T/96T
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥1250.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 96T | 产品价格： | ￥1750.0 |
威奥生物生产的ELISA试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在498 nm处测OD值，靶蛋白浓度与OD值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。
品质高：凭借多年的生物试剂盒研发经验，提供高灵敏度、高特异性的ELISA检测试剂盒； 技术精：技术服务人员拥有丰富的操作经验和精湛的技术，严格操作，保证高效、精准地完成检测； 服务全：根据客户实验要求设计、制定实验方案，同时为客户提供专业的数据分析服务； 价格低：以优惠的价格为客户提供最全面的服务，
一、检测原理：
威奥生物生产的ELISA 试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC 复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入 TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在 450 nm 处测OD 值，靶蛋白浓度与OD 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。二、试剂盒组分: （保存温度 4℃）
| 名 称 | 规格（48 T） | 规格（96 T） |
| 预包被酶标板 | 8×6 条 | 8×12 条 |
| 标准品 | 1 支 | 1 支 |
| 标准品/样品稀释液 | 10ml | 15ml |
| 生物素化检测抗体（100×） | 1 支 | 1 支 |
| 生物素化检测抗体稀释液 | 6ml | 12ml |
| SABC 复合物 | 6ml | 12ml |
| TMB 显色液（A/B） | 各 3ml | 各 6ml |
| 终止液 | 6ml | 12ml |
| 20×浓缩洗涤液 | 30ml | 60ml |
| 封板胶纸 | 2 张 | 4 张 |
| 产品说明书 | 1 份 | 1 份 |
3.1样本收集及制备
1)血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
2)血浆：应根据试剂盒的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，抗凝血离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
3)尿液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液：用无菌管收集。离心 20 分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
4)细胞培养上清：用于检测分泌性的成分，用无菌管收集。离心20分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
5)细胞沉淀：用于检测细胞内的成分，用 PBS 稀释细胞 悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过超声破碎或反复冻融(利用液氮和37ºC水浴对样品进行两到三次快速的冻融)，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清（如需要可取部分进行BCA蛋白定量）。-20°C 或 者-80°C 冷冻保存。
6)组织标本：切割标本后，准确称取组织重量。按重量(g):体积(mL)=1:9的比例，加入9倍体积的匀浆介质PBS。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集匀浆上清（如需要可取部分进行BCA蛋白定量）。-20°C 或者-80°C 冷冻保存。
3.2.试剂准备
1)提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。读数前15分钟打开酶标仪预热。
2)洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水）。
3)标准品配制：取 8 个 1.5ml 离心管，分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管 S1 中加入标准品/样品稀释液 900ul，第二至第八管中加入标准品/样品稀释液200ul，在第一管 S1中加入标准品溶液 100ul 置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 200ul弃去，第八管为空白对照。
4)生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟，用生物素化抗体稀释液将 100×生物素 化抗体稀释成 1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
5)SABC复合物工作液配置:使用前20分钟，用SABC复合物稀释液将100×浓缩ABC复合物稀释成1×工作液，当日使用，剩余弃之。
6)TMB 显色液的配置：使用前 10 分钟，将 TMB 显色液 A 液和 B 液 1：1 混合，避光放置备用。
3.3.检测程序总结
1)加样品及标准品，37℃反应 40 分钟。洗涤 5次。
2)加生物素化检测抗体，37℃反应 30 分钟。洗涤 5 次。
3)加 SABC复合物，37℃反应 20 分钟。洗涤 5 次。
4)加TMB显色液，37℃反应 10-20 分钟。
5）加入终止液，读数。
3.4结果判断与计算
1)所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接计算。
2)以标准品浓度作横坐标，OD 值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD 值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。
检详细检测程序:
- 加样：空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品 50ul，将反应板混匀后置 37℃， 40 分钟。
- 洗板：用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，每孔加入 1×洗液 350μl，每次震荡/浸泡 1-2 分钟，向滤纸上印干。
- 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液，其余孔各加入 1×的生物素化抗体工作液 100ul，混匀后置 37℃，30分钟。
- 洗板：同上。
- 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul，混匀后置 37℃，20 分钟。
- 洗板：同上。
- 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul，混匀后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。
- 每孔加入 100ul 终止液，混匀，30
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文献和实验有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法：1， TORCH及传染病试剂盒（间接法），见2.2.32， TORCH-IgM捕获法特色：包被抗体，标记抗原原理：3， 细胞因子试剂盒采用的方法路线（ABC-ELISA）原理产品特色：采用ABC法，灵敏度更高，特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的，使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
【资源】[共享]Adhesion Protein Protocols——（很有用的）
and Va... 3.2— Determination of the Permeability of Human Endothelial Cell Monolayers on Porous Filters 4— Notes Acknowledgment References 21— Induction of Intracellular Signals Through Binding of Adhesive Molecules: Activation of p125FAK
就可进行一次检测。3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量，排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣，BD于2005年初推出了CBA Flexset
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