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- 进口传代
- 2025年12月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A
- 细胞类型：
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A
- 肿瘤类型：
/
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
L Wnt 3A
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
永久
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A
- 是否是肿瘤细胞：
是
- 细胞形态：
正常
- 免疫类型：
/
- 物种来源：
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A
- 相关疾病：
/
- 组织来源：
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A
- 规格：
T25培养瓶
L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选稳转株。Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。这些细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它们是目前生产Wnt-3A条件培养基的最好来源。由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株(ATCC CRL-2648)作对照。
| 细胞英文名称 | L Wnt 3A | 细胞中文名称 | 小鼠皮下结缔组织细胞 |
| 形态特性 | 成纤维细胞 | 生长特性 | 贴壁生长 |
| 培养体系 | DMEM(高糖）+10%FBS | ||
| 传代方法 | 1:4~1:10传代；2~3天换液1次 | 传代情况 | |
| 冻存条件 | 无血清细胞冻存液 | ||
| 备注 | 悬浮细胞离心收集 | ||
STR：
1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；
2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养
小鼠皮下结缔组织细胞L Wnt 3A收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。
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文献和实验dishes (e.g., Corning® CellSTACK®). 6. CO 2 incubator and biosafety cabinet. 7. Filter bottle, 0.5–1 L, 0.2-μm pore size (Corning or equivalent). 2.2. Preparation of Wnt3A CM for Fractionation 1. 20% (v/v) Triton X-100. 2. 1 M Tris-HCl, pH
最好不要买商品化的ｗｎｔ3ａ做激动剂，我们实验室用过，效果不好，后来查文献才知道ｗｎｔ3ａ要经过棕榈酰化后才有活性，而在纯化的过程中棕榈酸经常被除去了，所以买的商品活性很差，很多人用表达ｗｎｔ3ａ的L细胞产生的上清来激活WNT。这方面文献很多。 superboyhcl lily628 wrote: ??http://www.stanford.edu/~rnusse/wntwindow.htmlp 这是一个斯坦福大学ＷＮＴ专业
v468.Chapter 3 分泌型跨膜相关蛋白提纯及Wnt抑制活性
above. Fig. 3.3. Dose-dependent inhibition of Wnt-3a-dependent, b-catenin stabilization inL929 cells by purified sFRP-1 and sFRP-2. After growth in serum-containing medium,L cells were incubated overnight in serum-free medium and then treated for 6 h
