- ￥1092
- mlBio/酶联生物
- ml3026
- 国内
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
26
- 英文名：
超氧阴离子测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光，低温保存
- 规格：
100管/96样
超氧阴离子测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理：
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基ben磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据ΔA值可以计算样品中O2－含量，反应式为NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：氯仿，自备。
超氧阴离子提取：
1.植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
3.血清或培养液：直接测定。
测定操作表：
分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至530nm。
1、操作表
| 空白管 | 测定管 | |
| 样本（μL） | 200 | |
| 提取液（μL） | 200 | |
| 试剂一(μL) | 160 | 160 |
| 混匀，37℃水浴20min | ||
| 试剂二（μL） | 120 | 120 |
| 试剂三（μL） | 120 | 120 |
| 混匀，37℃水浴20min | ||
| 试剂四（μL） | 200 | 200 |
| 混匀，8000g，25℃，离心5min，小心吸取上层水相200μL于微量石英比色皿/96孔板中，测定A530。ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。 | ||
超氧阴离子含量计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（nmol/g 鲜重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T=7.44× (ΔA+0.0027)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样×Cpr)×2=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T =7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子 含量（nmol/mL）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率（nmol/mL·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T= 7.44× (ΔA+0.0027)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.36mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2: 2分子O2－参与反应生成1分子NO2－。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（nmol/g 鲜重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样÷V样总×W)×2=297.52× (ΔA+0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率（nmol/ g·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T =14.88× (ΔA+0.0027)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反总÷(V样×Cpr)×2=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（nmol/ mg prot·min）= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2
=297.52× (ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率（nmol/104 cell·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T
=14.88× (ΔA+0.0027)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子 含量（nmol/mL）=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反总÷V样×2=297.52×(ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率（nmol/mL·min）= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T=14.88×(ΔA+0.0027)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.36mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；超氧阴离子测试盒Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2：2分子O2－参与反应生成1分子NO2－。
注意事项：
1、OD值大于1，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、样品制备后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、试剂四有一定的毒性，请操作时做防护措施。
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文献和实验氧依赖性杀菌途径 Mφ和中性粒细胞吞噬病原体后随之活化，在短时间内耗氧量显著增加，形成的氧代谢物对病原体有很强的杀伤作用，这一现象称为呼吸爆发(respiratoryburst)。其中的启动因素是位于胞质和吞噬体膜上的一种复合酶，称为烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶，该酶和吞噬体膜成分组合后，可将氧分子还原成超氧阴离子，并进一步产生游离羟基和过氧化氢，并在过氧化物酶和铁离子的参与下转化为单态氧。这些活性氧中间物具有很强的氧化和细胞毒性作用，可有
害。专性厌氧菌：只能在无氧的条件下生长繁殖的细菌，如产气荚膜梭菌、生孢梭菌。氧气对其有毒害，会抑制其生长甚至致死。二、氧气耐受性：1. 氧气还原为水的过程中，会形成某些有毒的中间产物，如过氧化氢、超氧阴离子等。其反应力强、不稳定，能破坏生物膜和生物大分子，对微生物造成毒害或致死。需氧菌和耐氧菌具有降解这些产物的酶，如过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶等，所以能在有氧条件下生长。而专性厌氧菌缺乏超氧化物歧化酶，所以只能在完全厌氧环境中生长。三、培养方法：培养不同需氧量微生物的试管1~5 试管内的培养基均
动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定 [原理] 超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(0 2 - )是人体氧代谢产物，它在体内过量积累会引起炎症
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