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维生素B6测试盒

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  • 2025年09月10日
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    • 英文名

      维生素B6测试盒

    • 保质期

      12个月

    • 供应商

      上海酶联生物科技有限公司

    • 保存条件

      避光,低温保存

    • 规格

      100管/96样

     
    维生素B6测试盒

    维生素B6测试盒
    微量法
    注    意:
    正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:
    维生素B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生:素,在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。

    测定原理:
    VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的化合物,在390nm有特征吸收峰。

    自备实验用品及仪器:
    天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

    试剂组成和配制 :
    提取液:液体70mL×1瓶,4℃保存。
    试剂一:液体1mL×1瓶,4℃保存。
    试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
    试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。
    试剂四:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。

    样本处理:
    1.组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟)。
    2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定。
    3.血清:直接测定。                

    测定操作:
      空白管 测定管
    样品(μL   40
    试剂一(μL 40  
    试剂二(μL 40 40
    试剂三(μL 60 60
    试剂四(μL 60 60
    充分混匀,25℃反应20min,于微量石英比色皿/96孔板,测定390nm处吸光值,记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

    计算公式:
    a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986
    1. 按照蛋白含量计算
    VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×Cpr)
                        = 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr
    2. 按照样本质量计算
    VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×W÷V样总)
                    = 13.76×(△A - 0.0205)÷ W
    3. 按照细胞数量计算
    VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)
                         = 13.76×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
    4. 按照液体体积计算
    VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷V样
                      = 13.76×(△A - 0.0205)
    V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
    b.用96孔板测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 0.1818x+0.0205,R2 = 0.9986
    1. 按照蛋白含量计算
    VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×Cpr)
                        = 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr
    2. 按照样本质量计算
    VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V反总÷(V样×W÷V样总)
                    = 27.52×(△A - 0.0205)÷ W
    3. 按照细胞数量计算
    VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)
                         = 27.52×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
    4. 按照液体体积计算
    VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷V样
                      =27.52×(△A - 0.0205)
    维生素B6测试盒V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g

    注意事项
    1.若测定结果中吸光值超过1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
    2.蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
    3.显色完成后立即进行测定。
     

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