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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
92
- 英文名:
维生素B6测试盒
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件:
避光,低温保存
- 规格:
100管/96样
维生素B6测试盒

微量法
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
维生素B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生:素,在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。
测定原理:
VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的化合物,在390nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制 :
提取液:液体70mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体1mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。
样本处理:
1.组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟)。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);加蒸馏水0.4mL,混匀后于25℃,16000rpm离心10min,取上清测定。
3.血清:直接测定。
测定操作:
| 空白管 | 测定管 | |
| 样品(μL) | 40 | |
| 试剂一(μL) | 40 | |
| 试剂二(μL) | 40 | 40 |
| 试剂三(μL) | 60 | 60 |
| 试剂四(μL) | 60 | 60 |
| 充分混匀,25℃反应20min,于微量石英比色皿/96孔板,测定390nm处吸光值,记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 | ||
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×Cpr)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×W÷V样总)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反总÷V样
= 13.76×(△A - 0.0205)
V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1818x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×Cpr)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V反总÷(V样×W÷V样总)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反总÷V样
=27.52×(△A - 0.0205)
维生素B6测试盒V反总:反应总体积,0.2mL;:V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项
1.若测定结果中吸光值超过1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3.显色完成后立即进行测定。
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文献和实验又称吡哆素。一种含吡哆醇或吡哆醛或吡哆胺的B族维生素。1936年定名为维生素B6。维生素B6为无色晶体,易溶于水及乙醇,在酸液中稳定,在碱液中易破坏,吡哆醇耐热,吡哆醛和吡哆胺不耐高温。维生素B6在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分,参与多种代谢反应,尤其是和氨基酸代谢有密切关系。维生素B6长期缺乏会导致皮肤、中枢神经系统和造血机构的损害。动物缺乏维生素B6的症状为皮炎、痉挛、贫血等。单纯的维生素B6缺乏症在人类极少见。临床上应用
书太大了,上传不了,需要的话我可以发到邮箱或者各位在网上载,assaydesigns公司网页就有。 licanming 怎么无人回啊?只好自己顶一下! zhidanguilai 检测PKC活性可以用加拿大Immunechem公司的非放射性蛋白激酶C活性分析试剂盒,安全、快速、稳定,可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理: 基于ELISA的基本
分析试剂盒安全、快速、稳定,可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理: 基于ELISA的基本原理。PKC底物被包被在酶标板上,在ATP存在的前提下,PKC激酶将底物磷酸化,洗掉游离的PKC激酶和其他成分。再加入特异性磷酸化抗体(只识别磷酸化底物,而与非磷酸化底物无交叉反应。)检测残留在酶标板上的磷酸化底物。通过酶标二抗放大信号,读出OD值(蛋白激酶活性与OD值的对数成正比)。与对照组相比,得出处理组的蛋白激酶活性
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