- ￥667
- mlBio/酶联生物
- ml2918
- 国内
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
118
- 英文名：
丙tong酸PA测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光，低温保存
- 规格：
100管/96样
丙tong酸PA测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
丙tong酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
测定原理：
丙tong酸与2,4-二硝基ben肼作用，生成丙tong酸-2,4-二硝ji苯腙，在碱性溶液中呈显色。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体2.5mL×1瓶， 4℃保存；
试剂二：液体12.5mL×1瓶， 4℃保存。
丙tong酸提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，25℃离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min， 8000g，25℃离心10min，取上清待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL样本和25μL试剂一，混匀，静置2min，加入125μL试剂二，丙tong酸PA测试盒混匀，于520nm波长处测定管吸光值A。
丙tong酸含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0466x + 0.0675； x为丙tong酸含量（µg/mL），y为吸光值。
2、按照血清（浆）体积计算
丙tong酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675)
3、按照蛋白浓度计算
丙tong酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照样品质量计算
丙tong酸含量（µg/g鲜重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
丙tong酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)
V1：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.0233x + 0.0675； x为丙tong酸含量（µg/mL），y为吸光值。
2、按照血清（浆）体积计算
丙tong酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷（V3×V1÷V2）=429.2×(A-0.0675)
3、按照蛋白浓度计算
丙tong酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V1×Cpr)=42.92×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照样品质量计算
丙tong酸含量（µg/g鲜重）= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(W ×V1÷V2）=42.92×(A-0.0675) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
丙tong酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷（500×V1÷V2）=0.086×(A-0.0675)
V1：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意：低检测限为1μg/mL或1μg/g鲜重或10ng/mg prot
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文献和实验代谢产物或原型药物在酶的影响下与内源性小分子发生结合，使药物毒性、活性降低或极性增加而易于排出的反应。在药物的Ⅱ相代谢中，与葡萄糖醛酸的结合反应最为常见，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）进行反应，形成葡萄糖苷酸，使其水溶性增加，易于排出体外。因此，在体外，如若加入肝微粒体和UGT系统，便可重建Ⅱ相代谢体系，从而进行Ⅱ相代谢稳定性研究。 3 肝微粒体体外温孵法实验方法描述 肝微粒体体外温孵法是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二
的影响下与内源性小分子发生结合，使药物毒性、活性降低或极性增加而易于排出的反应。在药物的 Ⅱ 相代谢中，与葡萄糖醛酸的结合反应最为常见，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA）进行反应，形成葡萄糖苷酸，使其水溶性增加，易于排出体外。因此，在体外，如若加入肝微粒体和 UGT 系统，便可重建 Ⅱ 相代谢体系，从而进行 Ⅱ 相代谢稳定性研究。3 肝微粒体体外温孵法实验方法描述肝微粒体体外温孵法是由制备的肝微粒体辅以氧化还原型辅酶，由微粒体中的糖醛酸转移酶催化尿苷二
。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。 3．甲基红（MR）试验 (1)原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 (2)方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基
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