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- mlBio/酶联生物
- ml2898
- 国内
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
98
- 英文名：
内切-β-1，4-葡聚糖酶Cx测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光，低温保存
- 规格：
100管/48样
内切-β-1，4-葡聚糖酶Cx测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
Cx（EC3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。
测定原理：
采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 10 | 10 |
| 试剂一 | 100 | |
| 蒸馏水 | 100 |
| 试剂二 | 200 | 200 |
内切-β-1，4-葡聚糖酶Cx测试盒
Cx活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、血清（浆）Cx活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷V样÷T
=14.305×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中Cx活力的计算
（1）按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(500×V样÷V样总) ÷T
=0.0286×(ΔA+0.0673)
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 3.2039x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、血清（浆）Cx活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷V样÷T
=28.61×(ΔA+0.0673)
3、细胞、细菌和组织中Cx活力的计算
（1）按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(V样×Cpr) ÷T
=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(500×V样÷V样总) ÷T
=0.057×(ΔA+0.0673)
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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文献和实验素酶中有十几到几十个组分,这些组分可分为三类: 内切葡聚糖酶(endo-glucanases ED)纤维二糖水解酶(exo-glucanase or cellobiohydraoases CBH)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidases GL)。一般认为，纤维素的生物（微生物）降解主要是由于这三类酶系的协同作用来完成的。但纤维素酶的降解机制尚不完全清楚。 自从1906年在蜗牛消化道发现纤维素酶以来，纤维素的微生物降解问题就得到了足够的关注。1954 年开始，美军 Natick实验室就已研究
的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③ 超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用，后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。 （1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；壳多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用，而其他几种酶对酵母作用显著。主要步骤为： ① 4 ℃ ，5000rpm 离心，15 min ，收集诱导
烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测. 2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化： 细菌的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法;② 高压匀浆;③ 超声破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化学渗透等.前三种方法属机械破碎法,并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用,后三种方法在实验室研究中应用较为广泛.下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤. 酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;壳多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要对细菌类有作用,而其
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